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目的:前列腺癌(PCa)是男性常见的恶性肿瘤之一,内分泌治疗一般是该病的首选治疗方案,但治疗后期患者多发展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC),化疗目前是CRPC重要治疗手段。鉴于化疗的副作用明显,而且不能显著延长生存期,临床迫切需要新的药物替代治疗或者辅助治疗,改善患者的生存现状。近年来的研究发现,弓形虫及其代谢产物可以改变细胞周期,诱导肿瘤细胞的凋亡,而弓形虫的排泄/分泌抗原(ESA)作为强免疫原,可以诱导机体产生强免疫应答反应,是作为疫苗的首选物质,同时又能诱导多种肿瘤细胞的凋亡。因此,本课题选用ESA作用于前列腺癌PC-3细胞,观察其对PC-3细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响并探讨其机制,为寄生虫抗肿瘤的新兴疗法奠定理论基础。方法:1.采用CCK-8法检测刚地弓形虫ESA对PC-3细胞增殖抑制的影响。2.采用细胞划痕法观察刚地弓形虫ESA对PC-3细胞迁移能力的影响。3.采用Transwell小室法观察刚地弓形虫ESA对PC-3细胞侵袭能力的影响。4.通过流式细胞术检测刚地弓形虫ESA对PC-3细胞周期、凋亡、活性氧和P-gp含量的影响。结果:1.CCK-8结果显示:当ESA浓度≧1000ug/ml时,PC-3细胞出现增殖抑制,并且当ESA浓度≧4000ug/ml时,ESA对PC-3细胞的增殖抑制效果呈时间—剂量依赖性(P﹤0.05)。2.细胞划痕结果显示:与对照组比较,浓度为2000?g/ml、4000?g/ml的刚地弓形虫ESA作用48h后,均对PC-3细胞的迁移能力有一定程度的影响,并且随着刚地弓形虫ESA浓度愈大,PC-3细胞的愈合率愈低(P﹤0.001)。3.细胞侵袭结果显示:与对照组比较,浓度2000ug/ml、4000ug/ml的ESA干预细胞48h后,均抑制了PC-3细胞的侵袭能力,并且ESA浓度越高,细胞侵袭能力越弱(P<0.05)。4.细胞周期结果显示:与对照组相比,ESA的浓度达到4000ug/ml时,作用PC-3细胞24h和48h后,细胞G1、S、G2期均发生明显改变(P<0.05),使细胞阻滞在G1期。作用72h后,细胞周期变化差异不明显。5.细胞凋亡结果显示:2000?g/ml浓度的刚地弓形虫ESA作用PC-3细胞48h、72h后可使其凋亡率增加,4000ug/ml的作用24h、48h、72h均可以增加细胞凋亡率,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.细胞P-gp含量显示:与对照组相比,4000ug/ml的ESA作用PC-3细胞48h后,P-gp含量明显减少(P<0.001)。7.细胞活性氧结果显示:与对照组相比,2000ug/ml、4000ug/ml的刚地弓形虫ESA干预PC-3细胞48h后,细胞内ROS的含量均明显增加,而且浓度越高,ROS含量越高,差异具有统计学意义(P﹤0.01)。结论:1.刚地弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)的浓度≧4000ug/ml的时候对PC-3细胞的增殖有抑制作用并且作用时间越长抑制率越高。当ESA浓度在1000ug/ml~2000ug/ml之间时,作用在48h内,抑制率呈时间依赖性,超过48h,抑制率不再上升。当ESA浓度小于1000ug/ml时,干预细胞时间超过48h,抑制率开始下降。2.刚地弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)作用PC-3细胞后通过阻滞PC-3细胞于G1期,抑制细胞的分裂进程且抑制效果与ESA浓度和作用时间相关,若超过48h效果反而不明显。3.刚地弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)可使PC-3细胞的迁移、侵袭能力减弱,并且抑制效果与ESA浓度呈正相关。4.刚地弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)干预PC-3细胞后使细胞的ROS含量升高、P-gp含量明显下降,可能通过损伤线粒体膜、逆转耐药等途径诱导PC-3细胞凋亡。