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[目 的]采用冻融-冻干法制备PEG修饰的脂质体流感疫苗冻干粉,通过影响因素实验和加速实验考察其物理稳定性和生物稳定性,并预测PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉有效期。[方法]温度影响因素实验和加速实验:采用冻融-冻干法分别制备PEG2000、PEG3000、PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉置于（40±2）℃下进行高温影响因素试验。PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉置于4℃、（25±2）℃下进行加速试验。以外观性状、粒径、Zeta电位、pH、包封率、稳定系数作为物理稳定性评价指标;小鼠腹腔免疫14 d,采用脾淋巴细胞增殖实验、脾T淋巴细胞表面标记实验和血凝抑制实验以刺激指数、CD4+/CD8+、CD3+CD8+、CD3+CD4+和免后与免前血凝抑制抗体滴度之比作为指标考察生物稳定性。有效期预测:PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉分别置于25℃、30℃、35℃、40℃条件下,每隔一定时间点取样腹腔免疫小鼠,免疫14 d,采用血凝抑制实验,测定免后与免前血凝抑制抗体滴度之比,计算4个温度下降解速度常数（K）,按lnK-1/T作图,拟合线性回归方程,lnK=b（1/T）+a。根据回归方程,计算其他温度下的K值,进而推算产品储存在37℃、25℃、4℃下的有效期。[结 果]温度影响因素实验:PEG2000、PEG3000、PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉,置于（40±2）℃条件下放置30 d,外观为白色伴有淡黄色,复溶后有肉眼可见的沉淀;Zeta电位和pH值基本无变化;从0d放置至30 d,PEG2000、PEG3000、PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉的粒径分别增大53.64%、41.92%、41.37%;包封率分别下降 16.18%、16.09%、14.83%;稳定系数分别增大24.85%、23.16%、21.96%。脾淋巴细胞增殖实验结果显示:（40±2）℃下放置0、5、10、20 d时,各组SI值与PBS组比较均有统计学意义（P＜0.01）;放置0 d时,各PEG组SI值比原液组大,且与原液组比较有统计学意义（P＜0.05）;放置5 d和10 d时,各PEG组SI值与原液组比较无统计学意义;放置20 d时,各PEG组SI值比原液组小,且与原液组比较有统计学意义（P＜0.05）。脾T淋巴细胞表面标记实验结果显示:在（40±2）℃下分别放置0、5、10 d,各组CD4+/CD8+比值、CD3+CD4+和CD3+CD8+百分比与PBS组比较均有统计学意义（P＜0.01）,放置0 d时,各PEG组CD4+/CD8+比值比原液组大,且与原液组比较有统计学意义（P＜0.05）,放置10d,各PEG组CD3+CD4+百分比与原液组比较无统计学意义。血凝抑制实验结果显示:在（40±2）℃下放置0、5、10 d,各PEG组免后与免前的血凝抑制抗体滴度之比均大于等于4,放置0d和5d时,PEG6000组与PEG3000组、PEG2000组比较具有统计学意义（P＜0.05）,放置20 d,各PEG组免后与免前的血凝抑制抗体滴度之比小于4。加速实验:三批PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉在4℃和（25±2）℃下放置3个月,外观均为白色疏松均匀粉末,复溶后分散均匀;Zeta电位和pH值基本无变化;三批样品放置3个月,4℃下粒径、包封率、稳定系数基本无变化,而（25±2）℃下,粒径分别增大46.57%、46.86%、46.44%;包封率分别下降 12.95%、11.73%,11.88%;稳定系数分别增大 22.90%、24.19%、22.20%。脾淋巴细胞增殖实验结果显示:放置1、2、3个月,4℃和（25±2）℃条件下的PEG6000组SI值与PBS组比较均有统计学意义（P＜0.01）,4℃下PEG6000组SI值与原液组比较有统计学意义（P＜0.05）;放置1、2个月时,（25±2）℃下PEG6000组的SI值大于原液组,放置3个月时,（25±2）℃ PEG6000组的SI值略小于原液组,但与原液组比较均无统计学意义。脾T淋巴细胞表面标记实验结果显示:放置0、2、3个月,4℃和（25±2）℃条件下的PEG6000组CD4+/CD8+比值与PBS组比较均有统计学意义（P＜0.01）;放置2、3个月,4℃下PEG6000组CD4+/CD8+比值大于原液组,（25±2）℃ PEG6000组CD4+/CD8+比值略小于原液组,但与原液组比较均无统计学意义。血凝抑制实验结果显示:4℃和（25±2）℃放置0、1、2、3月,小鼠免后与免前的血凝抑制抗体滴度之比均大于等于4,且三批样品间无显著性差异;放置3个月,4℃下PEG6000组免后与免前的血凝抑制抗体滴度之比变化不大,（25±2）℃下PEG6000组免后与免前的血凝抑制抗体滴度之比随放置时间的延长而减小。有效期预测:PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉的降解动力学过程符合一级动力学方程,25℃、30℃、35℃、40℃的分解速度常数分别为1.039×10-3 d-1、2.649×10-3d-1、3.574×10-3d-1、4.868×10-3d-1,lnK对 1/T 进行线性回归,回归方程为:lnK=20.195-8148.5/T（r=0.9179）。通过计算PEG6000修饰的脂质体流感疫苗在4℃下能储存约2.2年,25℃下能储存大约3.3月;37℃下能储存大约24天。[结论]PEG2000、PEG3000、PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉在（40±2）℃下放置10 d都具有良好稳定性。PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉在（25±2）℃下放置3个月仍能产生细胞免疫和体液免疫。根据推算PEG6000修饰的脂质体流感疫苗冻干粉在4℃下能储存大约2.2年,25℃下能储存大约3.3个月,37℃下能储存大约24天。