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来源与背景:我国胃癌80%以上为进展期,化疗在进展期胃癌的综合诊治中具有重要地位,但进展期胃癌很容易对5-FU等化疗药物耐药,是肿瘤复发转移的重要原因。研究5-FU的耐药机制并寻找逆转耐药的方法很有必要。目的和意义:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有明显的抗肿瘤和放化疗药物增敏作用,但其能否逆转胃癌耐药及分子机制仍不清楚。本研究旨在建立耐5-FU的胃癌细胞株SGC7901/5-FU,探讨EGCG在逆转SGC7901/5-FU耐药中的作用及可能分子机制,期待EGCG作为5-FU化疗增敏剂用于胃癌的临床辅助治疗。研究方法:大剂量冲击和浓度递增法建立5-FU耐药细胞株,MTT法和克隆形成实验检测药物处理后亲代细胞和耐药细胞的增殖活力,计算半数抑制浓度IC50值和耐药指数,Western blot检测SGC7901/5-FC(耐药相关蛋蛋;在此基础上,以EGCG为主要因素对SGC7901/5-FU分组进行处理,MTT和克隆形成实验检测处理后的细胞增殖活力,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白,ELISA、RT-PCR和Western blot检测耐药相关蛋白的表达,Western blot检测信号通路耐药相关蛋白的表达。另外,我们还建立了 SGC7901/5-FU的裸鼠移植瘤模型并以EGCG为主要因素分组处理,观察EGCG对SGC7901/5-FU裸鼠移植瘤的生长抑制情况,免疫组化检测各组移植瘤耐药相关蛋白MDR1和P-gp的表达,信号通路相关因子VEGF和p-TFAP2A的表达。所有实验均重复3次,数据以(?)±s表示,组间比较采用方差分析或t检验。研究内容和过程:耐药细胞株较亲代细胞株的IC50值明显升高,耐药指数RI为15.6,耐药相关蛋白ABCG2、P-GP、MDR-1和GST-π表达明显增加,不同5-FU浓度条件下,MTT法检测的耐药细胞株增殖活性均高于亲代细胞株(P<0.05)。5-FU+EGCG组较5-FU组耐药细胞株的IC50值显著降低,RI为0.12;5-FU+EGCG组耐药细胞株增值活性显著降低(P<0.05);对照组、EGCG组、5-FU组和5-FU+EGCG组处理后的SGC7901/5-FU以流式细胞法检测细胞凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.0±1.3)%、(6.0±1.2)%和(18.0±1.4)%,5-FU+EGCG组细胞凋亡率明显高于其他3组(F=129.5,P=0.0000);Western blot显示EGCG处理后耐药细胞中耐药相关蛋白MDR-1、P-gp、VEGF和p-TFA2A表达明显下降,促凋亡蛋白Bax和凋亡标志蛋白PARP表达显著增高(P<0.05),抗凋亡蛋白 Bc1-2 和 Survivin 表达显著降低(P<0.05);RT-PCR 检测 MDR-1、P-gp 表达亦下降,ELISA检测EGCG处理后VEGF表达下降。动物实验证明EGCG能够显著抑制SGC7901/5-FU裸鼠移植瘤的生长,免疫组化显示5-FU+EGCG组MDR-1、P-gp、VEGF 和 p-TFAP2A 表达均下降(P<0.05)。主要结论:1、大剂量冲击和浓度递增法可建立耐药性能良好的5-FU耐药细胞株SGC7901/5-FU;2、可在裸鼠身上成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/5-FU移植瘤模型;3、EGCG能够逆转胃癌耐药细胞株SGC7901/5-FU的耐药性,其机制可能是通过以下途径来实现:1.抑制肿瘤耐药相关蛋白MDR-1和P-gp的表达;2.促进凋亡标志蛋白PARP和促凋亡蛋白Bax的表达,抑制抗凋亡蛋白Survivin和Bc1-2的表达,从而上调了 PARP/Survivin和Bax/Bc1-2蛋白表达比值；3.抑制VEGF的表达,下调TFAP2A/VEGF信号传导通路。