论文部分内容阅读
肿瘤细胞分化诱导剂的研究和开发是目前抗癌药研究发展的一个热点。肿瘤的分化诱导是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，重新向正常细胞方向分化、逆转的现象。如目前应用于治疗白血病的维甲酸，就是一类分化诱导剂。但许多分化诱导剂在诱导肿瘤细胞分化、逆转的同时，对正常细胞也有一定的毒性，且长期应用细胞易产生抗药性。目前人们正积极寻找更高效无毒或低毒以及作用于新靶点的分化诱导剂。 苯丁酸钠是一类新型的分化诱导剂。其半衰期短，渗透性强，对正常细胞基本无毒副作用。已有的研究表明苯丁酸钠具有广谱抗肿瘤作用，除了体外对常见白血病细胞株的生长有抑制作用外，对前列腺癌、黑色素瘤等实体瘤细胞的生长亦有不同程度的抑制作用。因为它易透过 浙江大学ZboZ年硕土学位论文 血脑屏障，故本文将重点研究苯丁酸钠对脑胶质瘤细胞的抗肿瘤作用， 并探讨其作用机理。 关于苯丁酸钠的抗肿瘤作用及机理研究的文献目前报道不多。国 外的研究仍处于临床前期研究，而国内的研究报道更少。 目的： l、观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG．44 细胞的体外生长抑制及 细胞形态分化逆转。 2、观紊苯丁酸钠分别与常用抗癌药鬼臼喳吩成（VM26）、顺铂（DDP）、 阿霉素及卡氮芥（BCNU）联合应用对人脑胶质细胞瘤株SHG．44细胞 生长的影响和相互作用。 方法： l、MTT显色法 在 96孔细胞培养板上加一定密度（lxlo’／ml）的对 数生长期细胞悬液，180 VI，过夜后加入不同浓度的苯丁酸钠，20 VI／ 孔，均设6复孔，另设一个调零孔和9复孔VM26。培养48、72、96 ／J’时后，加入 MTT溶液（sing／ml）50 un孔；继续培养 4 ’J’时后，加入 三联溶解液（10％SDS．5％异丙醇．OO12mmol／L HCL（w／v八）以水溶解） 100PI／孔。于 37’C下半小时后，在酶标仪 570 urn波长下测定各光密度 值，计算生长抑制率。 二、细胞形态学观察 药物作用72小时后，直接在倒置显微镜下观察 其形态变化并拍照。 3、联合用药效果观察 在 96孔细胞培养板上加一定密度（lxlo’lml） 的对数生长期细胞悬液 180 DI，过夜，将试验设为两组：A组先加苯丁 3 渐江大学2002年硕士学位论文 酸钠，4 ，J、时后再分别加 VM26、顺铂、阿霉素及卡氮芥；B组先分别加 入VM26、顺铂、阿霉素及卡氮芥，4小时后再加苯丁酸钠。两组均培养 48小时后用饲TT显色法测定光密度值，计算生长抑制率。联合用药效果 评价用金氏公式判断：Q＝E．＋。／（巳＋Ek－E．＊E。），其中 E．＋。为合并用药抑制 率，E。和E。分别为A药和B药单用的抑制率。式中分于代表“实测合并 效应”，分母是“期望合并效应”，Q是两者之比。Q值 0．85－1．15为单 纯相加卜），＞1．15－2．0 为增强（＋＋），＜0．85－0．55 为桔抗（－），＜0．55 为明显桔抗（一）。 结果： 一、苯丁酸钠单独用药对脑胶质瘤细胞SHG－44 的体外抑瘤作用及 分化诱导 1、细胞生长半数抑制浓度（IC50）：通过 MTT显色法求得不同浓度及 不同时间的苯丁酸钠作用后细胞的生长抑制率，计算出各时间段的 IC50。从药物作用48h、72h、96h的IC50来看，苯丁酸钠对脑胶质 瘤细胞SHG－44的半数抑制浓度（IC50）分别为：112202ndml、84043 ug／ml、68077 ng／mlo 说明苯丁酸钠对脑胶质瘤细胞 SHG－44的抑 制作用存在时效关系。另外，从同一时间段的量效曲线来看，随着苯 丁酸钠浓度的增加，药物的抑制作用加强，其抑制作用呈浓度依赖性。 2、苯丁酸钠对 SHG－44细胞的分化作用：通过细胞形态学检测观察到， 未经药物处理的SHG－44细胞生长旺盛，形状不规则，呈多层生长， 胞体较小、胞浆透亮。经苯丁酸钠处理后，细胞生长明显受抑，重获 细胞生长的接触抑制，胞体渐变大变扁平，胞浆内有较多颗粒生成， 细胞突起增长明显。 4 浙江大学2002年硕士学位论文 二、苯丁酸钠与其他抗肿瘤药合用对SHG－44细胞生长的影响： 苯丁酸钠和 VM26联合应用能起到相互协同作用（P＜0刀5?