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本文选择在机体非特异性免疫中发挥重要抗感染作用的巨噬细胞和梅毒螺旋体早期感染中主要接触的微血管内皮细胞(HMEC-1)为靶细胞,来探讨Tp92是否可作为一个触发器启动宿主细胞主要炎症信号转导通路,并筛选出Tp92可能的靶细胞炎症信号转导通路,为进一步揭示Tp致病的分子机制打下基础。本实验用Tp92蛋白分别刺激巨噬细胞和HMEC-1细胞,ELISA检测其促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平。并根据预测的My D88/NF-κB、MAPKs/p38和NLRP3/Caspase-1三条信号转导通路,分别用其特异性抑制剂PDTC(Pyrrolidinedithiocarbamic acid)、SB202190和Z-YVAD-FMK阻断,ELISA检测Tp92作用靶细胞前后促炎细胞因子的分泌水平差异。若促炎细胞因子分泌水平有显著下降,既用Western blot检测Tp92作用靶细胞前后My D88、NF-κB、MAPK1/2、p38 MAPK、Caspase-1和NLRP3分子的表达水平差异;最后通过总活性比色法定量检测Tp92作用靶细胞前后乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性变化。研究结果如下:有效表达一个约92k Da大小的分泌性蛋白,经纯化后纯度达85%以上;一定浓度的Tp92蛋白可显著诱导巨噬细胞和HMEC-1细胞产生TNF-α、IL-1β和IL-6;特异性阻断My D88/NF-κB和MAPKs/p38信号通路后,ELISA结果显示巨噬细胞和HMEC-1细胞分泌的促炎细胞因子较阻断前均无明显降低,LDH活性检测结果显示LDH的活性也无明显差异,而特异性阻断NLRP3/Caspase-1信号通路后,ELISA结果显示巨噬细胞和HMEC-1细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-1β较阻断前有明显降低(P<0.05);Western blot结果显示Caspase-1和NLRP3分子的表达水平较阻断前均有明显降低;LDH活性检测结果显示LDH的活性较阻断前也有明显降低(P<0.01)。本实验得出结论,Tp92能促进巨噬细胞和HMEC-1细胞产生促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6,并且Tp92致使巨噬细胞和HMEC-1细胞产生炎症反应可能是通过NLRP3/Caspase-1途径。