‘火把梨’（Pyrus pyrifolia Nakai cv．Huobali）是云南本地的砂梨品种，云南本地把所有的红皮梨统称‘火把梨’，其红色果皮表型能稳定遗传，而梨果实着色最关键的因素是花色素苷的合成。花色素苷（anthocyanins）是类黄酮合成途径的有色末端产物，由花色素和糖构成，是植物重要的次生代谢产物，也是一种广泛存在于被子植物表皮细胞液泡中的水溶性色素，赋予植物花、叶、果实、果皮等器官各种色泽，而着色良好的红皮梨商业价值会更高。从分子生物学角度研究花色素苷的合成调控机制具有重要意义。该研究从云南特有‘火把梨’中克隆了与花色素苷生物合成相关的UDP-葡萄糖：类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶（UFGT），以及WD40（WD基元，Trp-ASP）和bHLH的cDNA序列，从文山红雪梨中克隆了转录因子MYB（带有色氨酸的转录因子家族），并采用qRT-PCR技术，以Actin基因为内参，对MYB基因在文山红雪梨幼叶、花、果皮以及种子中的表达进行了分析。1.以云南‘火把梨’为试验材料，用同源克隆的方法，克隆得到UFGT基因的cDNA片段，测序结果经拼接得到长1465bp的片段，编码479个氨基酸。BLAST同源比对显示，与苹果（Malusdomestica，BAI44431）、克莱门柚（Citrus clementina，XP₀06443177）、葡萄（Vitis vinifera，XP₀02270947）UFGT氨基酸同源相似性分别是99%、97%、96%；功能域分析发现该蛋白含有一个GT1_Gtf_Like功能域和一个GlycosylTransferase_GTB_type超基因家族。该基因无跨膜结构，不存在信号肽，属于非分泌蛋白，定位在胞液。UFGT蛋白质二级结构的主要结构元件是α-螺旋和无规则卷曲；基于Swiss Model的Ramachandran图显示，该蛋白空间结构较稳定，且空间障碍较小。2.以云南‘火把梨’为试验材料，采用同源克隆的方法，克隆得到了WD40基因片段，测序以后进行序列拼接，获得长度为1126bp的cDNA片段。包含一个完整的开放阅读框，编码371个氨基酸；对氨基酸序列进行比对分析，与桃（Prunus persica，XP₀07215608）、草莓（Fragariavesca subsp. Vesca，XP₀04304579）、毛果杨（Populus trichocarpa，XP₀02321066）、葡萄（Vitis vinifera，NP₀01268006）WD40在氨基酸水平上的同源性分别是94%、93%、92%、91%。WD40蛋白属于亲水性蛋白质，定位于细胞质基质，属于非分泌型蛋白。含有一个信号传导的WD40功能域，三级结构预测评价分析显示该蛋白质空间构象稳定。3.以云南‘火把梨’为试验材料，采用同源克隆的方法，克隆得到了bHLH基因片段，测序以后进行序列拼接，获得长度为1947bp的cDNA片段。编码581个氨基酸；对氨基酸序列进行比对分析，与苹果（Malus domestica，ABB84474）、碧桃（Prunus persica，XP₀07220209）、草莓（Fragaria vesca subsp. vesca，XP₀04308377）bHLH氨基酸序列的同源性分别是95%、95%、78%、。属于不稳定蛋白，整个多肽链表现为亲水性，属于亲水性蛋白质。含有两个典型的卷曲螺旋结构，其中HR2的置信值非常高，经分析是七肽重复区。该蛋白三维结构构象稳定，含有一个bHLH-MYC-N超家族和一个bHLH超基因家族。3.以文山红雪梨为试验材料，通过同源克隆方法，克隆得到MYB基因的cDNA全长，序列号为KF601227。生物信息学分析表明：MYB基因cDNA全长1551bp，编码244个氨基酸。该基因与梨中已知的MYB10（ADN26574）及R2R3MYB（ABX71487）的氨基酸序列的同源性分别为100%、98%，与白梨（Pyrus x bretschneideri，EU153577）MYB，苹果（Malus domestica，AB744001），山楂（Mespilus germanica，EU153574），皇家嘎啦（RoyalGala，EU518249）的氨基酸序列的同源性分别为97%、95%、93%、92%。该蛋白具有两个DNA结合位点，两个SNAT超基因家族。MYB在幼叶、花瓣、果皮和种子等含有花色素苷的器官中均有表达。