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第一部分复发性流产患者外周血中维生素D水平、Treg/Th17细胞的百分比及相关性研究目的:比较正常妊娠（Normol pregnancy,NP）妇女和复发性流产（Recurrent pregnancy loss,RPL）患者外周血中维生素D水平及调节性T（Regulatory T cells,Treg）细胞、辅助性17 T（Helper 17 T cells,Th17）细胞和中间型细胞Foxp3+IL-17+T细胞的百分比,分析维生素D水平与Treg细胞、Th17细胞、Foxp3+IL-17+T细胞百分比的相关性。方法:以NP为对照组（n=77）,RPL患者为病例组（n=215）,采集外周血,用电化学发光法检测维生素D（25（OH）D3）水平。采用梯度密度离心法分离NP组（n=48）及RPL组（n=107）的外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,采用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测PBMC中Treg细胞（CD4+Foxp3+标记）、Th17细胞（CD4+IL-17A+标记）和Foxp3+IL-17+T细胞（CD4+Foxp3+IL-17+标记）的百分比。此外,采用Spearman分析方法对RPL组（n=107）外周血中维生素D水平与Treg细胞、Th17细胞和Foxp3+IL-17+T细胞百分比及Treg/Th17比值进行相关性分析。结果:（1）与NP组（24.68 ng/ml±8.91 ng/ml）相比,RPL组维生素D水平明显降低（21.34 ng/ml±7.81 ng/ml）（P<0.01）;与NP组（5.72%±2.69%）相比,RPL组Treg细胞百分比（4.80%±1.95%）降低（P<0.05）;与NP组（1.26%±0.81%）相比,RPL组Th17细胞百分比（1.61%±0.97%）升高（P<0.05）;与NP组（0.20%±0.17%）相比,RPL组Foxp3+IL-17+T细胞百分比（0.27%±0.23%）升高（P<0.05）;与NP组（4.75±2.60）相比,RPL组Treg/Th17比值（3.60±1.98）降低（P<0.01）。（2）RPL组维生素D水平与Treg细胞百分比呈正相关（r=0.511,P<0.001）;维生素D水平与Th17细胞百分比呈负相关（r=-0.336,P<0.001）;维生素D水平与Foxp3+IL-17+T细胞百分比呈负相关（r=-0.268,P<0.01）;维生素D水平与Treg/Th17比值呈正相关（r=0.587,P<0.001）。结论:RPL患者外周血中存在较低的维生素D水平及Treg/Th17失衡;且维生素D水平与Treg和Th17细胞百分比有相关性。第二部分补充维生素D对复发性流产患者Treg/Th17失衡的调节及对临床结局的影响目的:比较试验组（Study group,SG）（补充维生素D）和对照组（Control group,CG）（不补充维生素D）外周血中的维生素D水平与Treg、Th17和Foxp3+IL-17+T细胞百分比。比较SG组和CG组8个月后的妊娠率和流产率。方法:将维生素D水平低于正常值（30 ng/m L）的RPL患者随机分成SG组（n=50）和CG组（n=50）。SG组口服维生素D胶囊2个月,每天2000 IU;CG组不给予维生素D。2个月后,再次采用电化学发光法检测两组外周血中维生素D（25（OH）D3）水平,并采用FCM检测两组外周血中Treg、Th17和Foxp3+IL-17+T细胞的百分比。在试验开始后第8个月时,追踪临床结局。结果:与CG组（18.29 ng/ml±6.02 ng/ml）相比,SG组补充维生素D两个月后外周血中维生素D水平（23.89 ng/ml±7.27 ng/ml）明显增高（P<0.001）。与CG组（4.63%±1.81%）相比,SG组Treg细胞百分比（5.53%±2.28%）增加（P<0.05）;与CG组（1.48%±1.05%）相比,SG组Th17细胞百分比（1.19%±0.93%）无明显差异（P>0.05）;与CG组（0.30%±0.17%）相比,SG组的Foxp3+IL-17+T细胞百分比（0.21%±0.17%）降低（P<0.01）;与CG组（2.99±1.53）相比,SG组的Treg/Th17比值（4.77±2.61）升高（P<0.001）。现追踪到SG组21例、CG组17例8个月时的临床结局;经统计,两组间的临床妊娠率和流产率无明显差异（P>0.05）。结论:补充维生素D后可升高RPL患者外周血维生素D水平、Treg细胞百分比,降低Th17细胞和Foxp3+IL-17+T细胞百分比。补充维生素D对RPL结局尚无影响。第三部分维生素D对Treg/Th17平衡调节的机制研究目的:探讨外周血中维生素D对Treg/Th17平衡的作用机制。方法:分离健康未孕妇女的PBMC,添加不同浓度维生素D3（1 n M/L、10 n M/L和100 n M/L）,体外培养4.5天。FCM技术检测对照组（不添加维生素D3）及不同浓度组Treg、Th17和Foxp3+IL-17+T细胞的百分比（n=8）。RT-PCR检测Foxp3、ROR-γT、VDR、CYP27B1和CYP24A1的m RNA表达水平（n=13）。结果:（1）与对照组（6.31%±1.60%）相比,1 n M、10 n M和100 n M组的Treg细胞百分比（分别为10.86%±2.54%、10.92%±2.42%、14.04%±2.77%）明显升高（P值均<0.01）;与对照组（2.32%±1.31%）相比,100 n M组的Th17细胞百分比（1.08%±0.48%）降低（P<0.05）;与对照组（3.86±3.25）相比,100n M组的Treg/Th17比值（13.92±8.85）升高（P<0.01）;各组之间Foxp3+IL-17+T细胞百分比无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,100 n M组的Foxp3 m RNA表达升高（P<0.01）;10 n M和100 n M组ROR-γT m RNA表达明显降低（P值均<0.001）;10 n M和100 n M组VDR m RNA表达明显升高（P值均<0.01）;10 n M和100 n M组CYP24A1 m RNA表达明显升高（P值均<0.001）;CYP27B1m RNA表达各组之间无明显差异（P>0.05）。结论:维生素D可调节Treg/Th17平衡,其可能是通过增加PBMC中Treg细胞和Th17细胞的维生素D受体和代谢酶的活性,促使Th17细胞向Treg转化。