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烟草黑胫病（Tobacco Black Shank）是由烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）引起的危害烟草生产的重要病害之一,可以危害所有的栽培烟草,破坏力极强,严重影响烟草的产量和品质。本研究在鉴别寄主接种鉴定的基础上,首次采用PCR-RFLP对0、1号生理小种的快速检测进行探索,为烟草黑胫病病原菌生理小种的快速鉴定及其鉴定的准确性奠定了坚实基础。从湖北省主产烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离、纯化获得30个烟草黑胫病菌株,采样地点覆盖襄樊市、恩施市、利川市、巴东县、宣恩县、咸丰县、来凤县、鹤峰县等多个烟区。分离物具有一致的培养性状:菌落无色,菌丝无隔;孢子囊近圆形,常不对称,具明显乳突,脱落后常有短柄;对烟草具有致病性。通过核糖体DNA（rDNA）序列分析,对供试菌株进行了分子鉴定,确定全部供菌株为烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var. nicotianae）。采用TTZ（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）显色反应和游动孢子悬浮液注射法接种鉴别寄主两种方法分别鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N. nesophila无致病力,为1号生理小种,占供试菌系80%,为湖北省优势生理小种;其它6个菌株中,其中4个菌株对NC1071有较强致病力,而对L8致病力较弱, 1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,而对L8有较强致病力;这6个菌株对N. nesophila无致病力,是否为2号生理小种或是其它致病型,尚待进一步研究确定。使用引物ITS1和ITS4,以两个生理小种菌株的DNA为模版进行PCR扩增,获得900 bp片段产物, DpnI和MboI 2种限制性内切酶对产物酶切,得到3个多态性片段,可快速区分0、1号生理小种。