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鸡α干扰素是鸡免疫相关细胞产生的一种高活性、多功能的生物活性糖蛋白,具有抗病毒活性。鸡α干扰素基因在受到禽流感病毒、新城疫病毒等外源物刺激后表达,然后诱导其下游抗病毒蛋白(AVP)基因表达,一起发挥抗病毒活性。其中Mx基因是一种十分重要的干扰素激活基因(ISG),所编码的Mx蛋白是目前国际上最为广泛研究的几种抗病毒蛋白之一。鉴于此,本研究对鸡α干扰素及其下游基因Mx展开研究,为控制和治疗禽类致病性病毒感染提供新的思路和手段。本研究选用H9N2 G1-like亚型禽流感病毒对健康6周龄雏鸡进行攻毒,攻毒3天后处死,取肺部提取总RNA,采用RT-PCR克隆鸡α干扰素(ChIFN-α)基因,构建原核表达重组质粒ChIFN-α-pGEX-5X3,经酶切鉴定,DNA测序等证实重组质粒构建正确。其序列全长489 bp,与IFNA3 (Accession: X92478)核苷酸序列相似性高达99%,说明鸡α干扰素基因相对保守。将ChIFN-α-pGEX-5X3转化Rosetta(DE3)plysS宿主菌,IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blotting印迹分析表明其表达产物为45 kDa左右的融合蛋白。在此基础之上,本研究进一步采用上述技术路线克隆鸡α干扰素下游基因Mx(ChMx),分别构建原核表达重组质粒ChMx-pGEX-4T3和真核表达重组质粒ChMx-pEGFP-N1,经酶切鉴定,DNA测序等证明重组质粒构建准确无误。继而将ChMx-pGEX-4T3转化Rosetta(DE3)plysS宿主菌, IPTG诱导, SDS-PAGE和Western-blotting印迹证实Mx表达产物为94 kDa左右的融合蛋白。最后割胶回收重组蛋白,与弗氏佐剂混匀制作免疫原,对SPF新西兰大白兔进行三次免疫(第一次为弗氏完全佐剂,后续为弗氏不完全佐剂),获得效价为1:400的多克隆抗体。对本课题组成功克隆到的鸡Mx基因编码的氨基酸序列与GenBank登陆的鸡和鸭的Mx基因编码的氨基酸进行多重比对,发现编码鸡Mx蛋白的氨基酸序列呈现高度多态性,序列中呈现14个多态性位点,主要集中在N末端,第631位氨基酸均为Asn或者Ser。