水稻田异型莎草对苄嘧磺隆的抗性机制

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:clarrencewarren
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
异型莎草(Cyperus difformis L.)作为水稻田的主要杂草之一,具有种子产量大、分蘖能力强等特点,严重影响水稻的产量。在水稻生产中多采用ALS抑制剂类除草剂防控异型莎草,最常用的是磺酰脲类的苄嘧磺隆。该药剂对莎草科和阔叶类杂草均有良好的控制效果,但由于长期过度使用,多种稻田杂草对其产生了抗性,特别是导致了苄嘧磺隆对异型莎草的防效明显下降。本研究采集了湖南和广西两地不同水稻田的异型莎草种群,采用室内生物测定方法,测定了不同异型莎草种群对苄嘧磺隆的抗性水平及对其他除草剂的敏感性;采用基因克隆、转录组测序、荧光定量和基因外源表达等技术手段,研究了异型莎草抗性种群对苄嘧磺隆的靶标抗性机制,以及与代谢有关的非靶标抗性机制,旨在为异型莎草的抗性综合治理提供科学依据。主要研究结果如下:(1)不同异型莎草种群对苄嘧磺隆的抗性水平差异较大。采用区分剂量法,对从湖南和广西两地采集的74个异型莎草种群进行苄嘧磺隆抗性种群甄别,发现有33个种群对苄嘧磺隆产生了抗性。对其中22个抗性种群(R)以及2个敏感种群(S)进行剂量反应测定,结果表明,19个种群为高抗型,2个种群为中抗型,1个种群为低抗型。有3个R种群(HN-3、HN-9、HN-10)的GR50值超过2880 g a.i./ha,抗性指数(RI)超过1309;2个S种群(HN-S和GX-S)的GR50值均低于2.5 g a.i./ha;其它R种群的GR50值在12.1-1071.0 g a.i./ha之间,RI在5-487之间。(2)部分异型莎草R种群对其他除草剂产生了交互抗性或多抗性。采用单剂量法分别测定异型莎草种群对ALS抑制剂五氟磺草胺、PSII抑制剂灭草松和激素类除草剂二甲四氯的敏感性,结果表明,有18个R种群对五氟磺草胺产生了交互抗性,7个R种群对二甲四氯产生了多抗性,5个R种群同时对苄嘧磺隆、五氟磺草胺和二甲四氯产生了多抗性,所有种群对灭草松仍然敏感。(3)靶标基因发生突变是异型莎草对ALS抑制剂产生抗性的原因之一。采用基因克隆的方法获得供试种群的靶标基因ALS和psb A的序列,比较R与S种群保守区的位点差异,结果表明,80%(8/10)的湖南种群和20%(13/64)的广西种群ALS基因均存在突变位点。其中,具有高水平抗性的5个湖南种群的第574位氨基酸由色氨酸(Trp)突变为亮氨酸(Leu),RI最高超过了1309;有17个种群的第197位氨基酸由脯氨酸(Pro)分别突变为亮氨酸(Leu)、丝氨酸(Ser)、精氨酸(Arg)和丙氨酸(Ala),以该位点突变为主的广西种群抗性水平较低,RI在5-89之间;有4个种群的第376位氨基酸由天冬氨酸(Asp)突变为谷氨酸(Glu)。R种群的psb A基因未检测到突变。采用荧光定量技术对异型莎草靶标基因ALS的表达量进行分析,结果表明R种群与S种群的ALS基因表达差异不显著。(4)部分异型莎草R种群存在代谢抗性。使用P450抑制剂马拉硫磷对部分种群进行处理,发现有12个R种群对苄嘧磺隆的抗性能够被逆转。分别选取一个S种群和具有代谢抗性的R种群进行转录组测序,根据数据分析结果选择部分与代谢解毒相关的上调基因(CYPs、ABCs、UGTs、GST)进行基因克隆和荧光定量验证。对验证后的候选基因进行转录水平的表达差异分析,结果表明,在施用苄嘧磺隆后,CYP71FL1、CYP74B57、CYP94C180基因在0-2 d内持续高表达,且R与S种群中的表达量差异显著(P<0.05);GST和UGTs基因在药后不同时间点呈现起伏变化,但表达量处于较低水平,且R与S种群中的表达量差异不显著。(5)异型莎草P450基因的外源表达结果表明CYP71FL1、CYP74B57介导了异型莎草对苄嘧磺隆的抗性。采用RACE和PCR技术获得CYP71FL1、CYP74B57和CYP94C180的全长编码序列,通过无缝克隆构建重组质粒并分别转化至拟南芥和酿酒酵母中。使用除草剂对转基因拟南芥进行抗性评价;采用高效液相色谱法(HPLC)测定重组酵母对苄嘧磺隆的代谢率,并采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术(UPLC-QTOF-MS/MS)鉴定降解产物。结果表明,过表达CYP71FL1、CYP74B57拟南芥对苄嘧磺隆和灭草松都产生了抗性;重组CYP71FL1酵母培养物在诱导16 h后对苄嘧磺隆的代谢率达23%,重组CYP74B57、CYP94C180酵母对苄嘧磺隆均无降解作用。本论文的研究结果表明,我国水稻田异型莎草的抗药性情况已经较为严重,靶标抗性机制与代谢相关的非靶标抗性机制共同促进了抗药性杂草的进化和发展,这为异型莎草的抗药性综合治理提供了科学依据,具有重要的现实意义。
其他文献
随着中国农村改革的不断深入,我国农业生产迈入转型升级时代,落后的生产方式逐渐被新型生产方式所取代。农业生产的社会化服务是农业生产发展到一定阶段后的产物,在我国农业转型升级中发挥着重要作用。水稻商品化育秧是指通过商品交换将育成的水稻秧苗销售给农户种植的社会化服务方式,是水稻产业社会化服务中的重要组成部分,但是,现有商品化育秧还难以适应水稻产业转型升级的要求。因此,研究水稻商品化育秧的发展,对于推动我
学位
分子标记是植物种质资源遗传多样性和亲缘关系分析的重要工具。新型分子标记的开发可以挖掘一些新的多态性位点,有利于种质资源评价与遗传多样性分析。顺式元件调控基因的表达水平,在植物基因组中保守且广泛存在,具有开发成新型分子标记的潜力。本研究以八个顺式元件基序作为引物核心,设计了一种基于顺式元件扩增多态性的靶向于启动子和基因区域的分子标记技术,命名为Cis-element amplified polymo
学位
党的十九大报告提出全面实施乡村振兴战略,其中重点推进乡村产业振兴,由乡村产业振兴带动全面振兴。近年来,苏州市高新区利用自身发展特色,推进相关政策落实部署,进而加速推动区域特色产业——黄桃产业的发展,取得了较好的成绩。截至2021年,苏州高新区果品种植面积为6130.5亩,年产量5200.9吨,总产值7697.5万元。其中黄桃种植面积1531.1亩,占全区果园种植面积的25%,年产量2617吨,年产
学位
党的十九大报告提出深入贯彻实施乡村振兴战略,坚持产业发展先行,是服务乡村振兴的前提基础和关键举措,聚焦特色农业产业发展有利于助力乡村振兴开拓新路。食用花卉集食用、观赏、营养等多元价值于一体,全方位、多途径开发利用食用花卉资源,是契合大食物观、培育广西现代特色农业新增长点的主动选择。本文以广西食用花卉为研究对象,通过文献阅读、实地调查、问卷调查、SWOT分析等研究方法,对广西食用花卉资源现状、开发现
学位
在我国南方酸性土壤中种植的花生,由于受到铝毒害的影响,抑制了根的生长,使该地区花生的产量低于全国平均水平。铝诱导细胞程序性死亡(PCD)是铝毒害的重要机制,但其相关的分子机制还远未厘清。本文中我们关注花生铝胁迫响应过程的上游信号组分和下游功能元件。研究发现,细胞的逆境信号响应组分凝集素类受体蛋白激酶(Lec RKs)参与调控植物的PCD。胚胎晚期发育丰富蛋白(LEA)是重要的胁迫相关蛋白,在植物逆
学位
冬瓜在我国具有广泛的栽培面积和悠久的栽培历史,是我国南菜北运的重要蔬菜之一。作为一种鲜食蔬菜,冬瓜果皮颜色已经成为影响其商业价值的重要外观品质之一。许多葫芦科作物在果皮颜色方面都有了较为深入的研究,而冬瓜在果皮颜色的研究方面明显滞后,相关的基因也很少被克隆。本研究以两个绿皮与白皮冬瓜的杂交组合(GX-71×MY-1,KX-2×YO-16)为研究对象,构建F2和BC1P2群体,探究冬瓜果皮颜色的遗传
学位
识字写字教学是小学语文教学的重要内容,但目前小学的识字写字教学没有得到充分重视,小学识字写字教学的状况堪忧,小学生的识字量不足,错别字连篇,字迹潦草,章法混乱。为解决这一问题,笔者参加了马鞍山市市级规划课题“初中小学语文识字写字衔接教学的实践研究”的相关研究工作,根据调查研究,本文提出在小学语文识字写字教学实践中融入相关字理知识,引入“十黄格”策略,以期改善目前的识字写字教学状况。
期刊
花生是我国重要的油料作物,富含多种营养成分。花生种植土壤适宜的pH值偏中性,而我国花生种植土壤条件多为酸性。酸性条件使得铝元素以可溶性离子存在于土壤中,导致土壤肥力下降,铝毒害抑制花生生长发育。类受体蛋白激酶在植物胁迫应答中发挥重要作用,参与细胞信号转导、调控植物先天免疫反应以及细胞死亡调控等生物过程,但其在铝胁迫响应中的作用尚不清楚。本实验以99-1507(耐铝)和中花2号(ZH2,铝敏感)两个
学位
本文以苋菜为试验研究对象,对其进行不同肥料配比的施肥处理,分析施肥处理对苋菜植株中苋菜红素含量、苋菜植株根际土壤生物学性状和微生物以及根系内生微生物群落结构的影响,旨在挖掘和利用有益微生物资源及其功能,发展可持续农业的同时,为生产出高品质的功能性作物新的研究方向提供参考依据和技术支撑。试验共设置不施肥(CK)、缺钾处理(NP)、缺磷处理(NK)、缺氮处理(PK)和平衡施肥处理(NPK)5个处理,基
学位
在水土流失严重的热带-亚热带集约化农业坡地,土层浅薄、蓄水性差,过度施肥与降雨径流的耦合作用使得大量氮磷养分随着泥沙和径流从农田流失通过沟渠进入下游河湖水体,导致水质恶化。因此,如何控制这种水蚀型面源污染物向下游水体输送愈来愈受到人们的关注。本研究在广西客兰水库水源区那辣小流域下游500米长的农用沟渠构建植物拦截系统,隔段种植当地优势植物狗牙根[Cynodon dactylon(L.)Pers]和
学位