饲料用高活性植酸酶提取,纯化及活力分析

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bluebird2000
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近些年国内外针对植酸酶的研究都是一个焦点话题,目前大部分植酸酶生产还是采用的微生物生产方法,利用培养发酵的技术获得,可是弊端还是存在的,例如发酵周期长,培养基成本高等。本文探究植物植酸酶的酶学性质,利用特有饲食两用小黑麦,按照国标新标准测量粗酶液活性,随后提纯小黑麦植酸酶,以期测得高活性植物小黑麦植酸酶活性,探究其酶学性质。本实验总结前人的方法,根据09年新国标标准推荐,使用钒-钼酸铵法测定植酸酶活性。根据风干样品粉末从最适缓冲液pH、最适固液比探索、最适提取时间探索、最适活性剂浓度探索四个方面探究小黑麦最适提取条件。确定了pH5.0的提取缓冲液,固液比为10,在室温200rpm震荡1h,不添加活性剂的条件下提取的植酸酶活性最高,此为最适提取条件。根据最适提取条件提取粗酶液,探究用盐析法得到浓缩植酸酶酶液,利用透析法初步除盐。再利用DE-52阴离子层析柱对除盐酶液纯化,纯化后经SDS-PAGE电泳定纯化纯度,研究纯化后小黑麦植酸酶酶学性质,发现酶的在pH3.0~7.0之间均较为稳定;小黑麦的植酸酶反应最适温度为37℃;在80℃下保温1h,小黑麦植酸酶剩余活性在20%以上,小黑麦的植酸酶Km=0.373mmol/L,Vmax=243.9mmol/min。本实验的材料为特有饲食两用小黑麦,实验方法易于操作,结论得出小黑麦植酸酶活性高,可得到提取效果和纯化效果,而且属于纯植物性植酸酶,利用在实际生产中安全环保,此实验内容针对麦类植酸酶利用有广阔应用前景。
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