研究目的:在血管相关性疾病中,膜联蛋白A2(Annexin a2,AXⅡ)被认为是一种诱导新生血管形成的重要介质。对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)而言,新生血管网形成的血管翳在其疾病的发展过程中发挥至关重要的作用,它的侵蚀作用是引起关节骨质不可逆性破坏、关节畸形与功能障碍的病理基础。目前,在临床上并没有有效的措施可以完全治愈RA。虽然关于RA的研究很多,但是AXⅡ和血管翳形成之间的相关性还没有被报道。本研究的目的是为了确定AXⅡ是否有助于RA中的血管翳形成,并探讨它所涉及的具体相关机制。研究方法:本研究通过查找基因表达库基因芯片的数据,比较RA患者与骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者和正常健康人群滑膜组织中AXⅡ和膜联蛋白A2受体(Annexin a2 receptor,AXⅡR)的表达。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA患者与普通炎症性疾病患者血清中可溶性AXⅡ的表达水平。接下来,利用DBA/1小鼠建立胶原诱导的关节炎(collagen induced-arthritis,CIA)动物模型,通过外源性注射AXⅡ的方法,观察AXⅡ在关节炎发生、发展中的作用。再通过比较CIA小鼠的足掌厚度、关节评分与关节炎的发病率,作为衡量AXⅡ影响关节炎严重程度的指标。收集小鼠关节组织,利用苏木精—伊红(H&E)染色法观察炎性关节组织的病理改变,运用影像学技术X射线和显微CT比较各组关节骨组织的破坏情况。为了检测新生血管形成的变化,本研究利用免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)分析微血管内皮细胞表面标记物——CD31的表达,并进行CD31定量分析。CD31表达量的多少代表新生血管形成的密度高低。在细胞学研究中,一方面,利用质粒转染技术,通过抑制人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)上AXⅡR mRNA的表达,观察AXⅡ/AXⅡR与刺猬(Hedgehog,HH)信号通路之间的关系;另一方面,将HUVEC与HH信号特异性抑制剂——环杷明(cyclopamine,CYC)共培养,以确定HH信号与细胞增殖之间的关系。抑制AXⅡR表达后,利用qRT-PCR技术比较HH信号转导途径的关键分子和促血管生成因子的表达差异。研究结果:与OA患者和正常健康人群相比较,RA患者滑膜组织中AXⅡ和AXⅡR的表达增高,并且RA患者血清中可溶性AXⅡ的表达水平也显著高于普通炎症性疾病患者。在CIA动物模型中,利用AXⅡ干预的关节炎小鼠的关节肿胀程度增高,新生血管形成显著增多。细胞实验显示,高表达的AXⅡ通过结合AXⅡR促进HUVEC的增殖。进一步的机制研究表明,AXⅡ能够上调HH关键分子Ihh与Gli的表达;抑制AXⅡR的表达后,Ihh、Ptc、Smo与Gli的表达显著下调,并且HH信号下游的促血管生成因子基质金属蛋白酶-2(MMP-2),血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2(Ang-2)的表达也下调。结论:与普通炎症性疾病患者和健康人群相比较,AXⅡ与AXⅡR在RA患者中高表达。本研究第一次明确观察到AXⅡ能够促进CIA的发展,尤其是在血管翳形成过程中发挥着不可替代的核心作用。AXⅡ发挥的这一核心作用是通过结合AXⅡR后激活并调节HH信号及其下游VEGF,Ang-2和MMP-2的表达,引起HUVEC增殖,最终促进新生血管生成。因此,研究AXⅡ的作用对于了解RA的发展具有指导意义,抑制AXⅡ的效应有可能为治疗RA提供一个新的指导措施。