论文部分内容阅读
目的:本研究以人结肠癌HCT116细胞株为模型,运用RNA干扰技术,建立Musashi1(Msi1)稳定低表达的HCT116细胞株,并接受放射线外照射,研究沉默Msi1对人结肠癌HCT116细胞株放射敏感性的影响,并初步探讨其机制,为临床治疗提供理论依据。方法:1应用慢病毒载体,建立Msi1低表达的稳转细胞株(HCT116-Musashi1)及阴性对照组细胞株(HCT116-negative control)。2通过克隆实验,测定沉默Msi1基因对HCT116细胞的放射敏感性的作用。3采用MTS法检测,沉默组(Silence组)、空白组(Control组)、阴性对照组(NC组)细胞接受8Gy照射后的24h、48h、72h各组细胞的增殖活性及增殖抑制率。4采用流式细胞技术检测8Gy照射后的24h、48h、72h,沉默组(Silence组)、空白组(Control组)、阴性对照组(NC组)的细胞凋亡比例,以及12Gy照射后48h三组细胞周期分布的变化。结果:1通过克隆形成实验,根据单击多靶模型拟合出生存曲线,Silence组的细胞放射敏感性明显高于NC组和Control组,而NC组与Control组之间放射敏感性未见明显差异。2细胞增殖实验研究显示,与未照射组相比,8Gy剂量组中Silence组,NC组,Control组在照射后24h、48h、72h,细胞增殖速率均减低,但Silence组细胞在各时间点的增殖活性均明显低于NC组和Control组(P<0.001),而NC组和Control组之间未见明显统计学差异(P>0.05)。随着时间增加,各组增殖抑制率逐步增加(P<0.001),呈现时间依赖性,而Silence组的抑制率始终高于另外两组(P<0.05),NC组和Control组之间未见明显统计学差异(P>0.05)。3细胞凋亡实验表明,8Gy照射后24h、48h、72h,Silence组凋亡比例始终高于NC组和Control组,差异有统计学意义(P<0.001),而NC组和Control组之间未见明显统计学差异(P>0.05),并且随着时间增加,三组细胞凋亡比例均增加(P<0.001),其中Silence组在各时间点凋亡比例增加的程度始终高于另外两组。4细胞周期实验表明,12Gy照射后48h时,Silence组细胞周期中G2/M期比例较Control组和NC组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1降低Musashi1的表达对结肠癌HCT116细胞具有放射增敏作用;2降低Musashi1的表达可能通过促进凋亡,解除G2/M期阻滞,发挥放射增敏作用。