CDK是一类依赖cyclin的蛋白激酶,在细胞周期调控网络中处于中心地位。CDK4作为细胞进入增殖周期的第一个被激活的周期蛋白依赖性蛋白激酶,是细胞周期进程中G1/S期转换的限速因子。CDK4的活化状态是细胞能否进入增殖周期的关键。许多研究表明,CDK4与肿瘤的发生、发展和预后关系密切。CDK4对细胞周期的调节作用,主要表现在其与cyclin D1特异性结合形成复合物,该复合物能够推进细胞周期G1期到S期的演进。研究者们通过对CDK4基因敲除等策略作用于多种肿瘤细胞时,肿瘤细胞的生长均得到了有效的控制。因此,CDK4已经成为人们进行肿瘤基因治疗的靶点之一。胞内抗体技术是近年来兴起的以抗体作为效应分子的能够在细胞内高效地、特异地灭活靶蛋白,并实现蛋白表型敲除的一种技术。通过对单链抗体基因编码蛋白的N端或C端进行修饰后可以形成不同定位型的单链抗体,从而可以在细胞内任意区间灭活靶蛋白,为肿瘤的基因治疗开辟了新的思路。为此,本研究克隆了细胞核定位型抗人CDK4胞内scFv基因(NLS-AK),并成功构建其重组真核表达载体pNLS-AK,通过细胞转染、RT-PCR、免疫荧光、Western-blot、免疫共沉淀、MTT法生长增殖特性分析、流式细胞术等方法分别对NLS-AK的表达及胞内定位情况、体外生物活性等进行了研究。结果表明,NLS-AK基因能够在肿瘤细胞中有效表达并实现胞内抗体的目标定位。NLS-AK基因的稳定表达能够显著抑制细胞生长和增殖,引起细胞周期阻滞,并明显诱导细胞凋亡。综上所述,以CDK4为靶点的胞内抗体治疗作为一种新型肿瘤基因治疗方法,具有潜在的应用价值。