过氧化氢酶又称触酶,是一类广泛存在于动物、植物和微生物体内的末端氧化酶,酶分子结构中含有铁卟啉环,1个分子酶蛋白中含有4个铁原子,专一分解过氧化氢,溶于水,几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚。过氧化氢酶是在生物演化过程中建立起来的生物防御系统的关键酶之一,其生物学功能是催化细胞内过氧化氢分解,防止脱脂过氧化。过氧化氢酶的研究可追溯到19世纪初,迄今它已经成为农业,以及与之相关的食品与乳制品业、纸浆和造纸业、以及农业环保产业中有应用价值的酶之一。首先,本研究以猪血为原料,采用sephadex G-100层析和PEG-6000分子筛层析法纯化了过氧化氢酶。提取纯化的结果是100 mL猪血红细胞经提取纯化冷冻干燥后可提取得0.64 g过氧化氢酶。猪血红细胞中总酶活性为109037 mmol/min/mL,粗酶液酶活性为29796 mmol/min/mL,纯化后酶活性为87448 mmol/min/mL,活力回收率约为80.2%。然后,通过单因素和多因素实验确定了过氧化氢酶活性测定的最佳提取方法。本实验采用全波长扫描分析仪,对过氧化氢与钼酸铵所形成的淡黄色络合物(钼黄)进行了吸收峰的扫描,测定条件是测定波长为405 nm,pH=7.4,反应时间为3 min。最后,对过氧化氢酶的性质进行了研究。测定了温度、pH值、NaN3和KCN,以及不同金属离子对过氧化氢酶活性的影响。采用SDS-PAGE实验测定纯化后的猪血过氧化氢酶的亚基分子量。过氧化氢酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,进行糖蛋白染色,用苯酚-硫酸法测其中性糖含量。