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栓皮栎(Quercus variabilis Bl)是我国传统的特有经济树种,是我国最重要的软木资源,通常采用种子繁殖,由于橡实象鼻虫的侵害和种子不能较长时间贮藏,加之扦插繁殖困难,目前主要依靠天然更新。由于过度采伐利用,资源已近枯竭。因此,为栓皮栎基因资源保存和快速繁殖优良无性系建立稳定高效的离体再生体系具有重要的实践意义,同时也填补了我国栓皮栎组织培养研究的空白。 本研究以4~6个月生的栓皮栎实生苗为试材,系统的研究了离体茎段培养中所涉及的各种影响因素,包括外植体消毒,褐变的抑制,初代、继代培养基的筛选,最佳继代激素浓度的配比、最优生根培养基及激素浓度、种类的配比选择;同时,为了获得离体叶片再生植株,研究了以叶片为外植体诱导愈伤组织的形成和分化。具体结果如下: 1.最佳的外植体消毒方法是:70%酒精表面消毒30s后,用NaOCl(有效氯10%)浸泡10min,再用无菌水冲洗2次,接着0.1%HgCl浸泡消毒2min,无菌水冲洗3次。 2.在培养基中添加0.1g/l的Vc可有效的抑制初代培养中出现的褐变现象,仅有5.7%的外植体因褐变死亡。 3.茎段初代培养选用低盐培养基WPM、BTM和GD附加6-BA0.2mg/l均好于高盐培养基MS,丛芽较多,茎粗壮,生长势健壮。 4.继代培养时添加低浓度6-BA(0.2~0.6mg/l)对芽的增殖生长有利,高浓度的6-BA(0.8~1.0mg/l)对茎芽伸长有一定的负面影响,表现为叶片扭曲、玻璃化或高度愈伤化,抑制了芽的分化。 5.在培养基中添加3.0~5.0mg/l的GA3对茎的伸长有明显的促进作用,但不能连续使用,否则会使叶片发育不全,植株细弱,不能用来继续进行生根培养。 6.继代培养中连续使用同一种培养基(BTM),会出现植株老化现象,死亡率达50%以上,改用WPM培养基后,这些症状均消失。 7.从生根数、根长和生根率各因素综合考虑,以WPM附加NAA0.1mg/l、IBA0.25mg/l时生根效果较好,生根率达到78.6%,明显好于MS和1/2MS。单独使用NAA时生根效果不好,生根率低且多为愈伤根。 8.以叶片为外植体诱导愈伤组织,2,4—D的效果好于NAA和IBA;WPM培养基附加6-BA1.0mg/l和2,4-D1.5mg/l时,愈伤诱导率达100%,愈伤量为95.2%,优于MS和1/2MS培养基。