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目的：1、本文通过检测宫颈病变患者宫颈上皮脱落细胞中人端粒酶mRNA (human telomerase mRNA component, hTERC)基因和c-myc基因的表达以及人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)的感染情况和液基细胞学检测的分级,以临床病理结果为金标准,分析比较液基细胞学、HPV检测、hTERC和c-myc基因扩增检测对宫颈病变的预测价值。2、将c-myc基因、hTERC基因、HPV亚型及薄层液基细胞学(thinPrep cytologic test,TCT)的检查结果进行比较及相关性的分析,拟寻求宫颈病变筛查更准确的联合检测方法。3、对行宫颈锥切和子宫切除治疗的CIN患者进行随访,检测hTERC、c-myc基因、HPV亚型及TCT,探讨hTERC、c-myc基因检测及其联合HPV、TCT检测在CIN手术治疗后随访中的价值。方法：选择2011年1月～2011年9月就诊于重庆医科大学附属第一医院妇科的1000例已婚或有性生活史,年龄25～64岁,符合入选要求的妇女。所有入选患者均刷取宫颈脱落细胞行液基细胞学检查,其残留液同时用作荧光原位杂交(fluorescence in situ hxbridization, FISH)技术检测c-myc基因、hTERC基因的表达,表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术检测HPV亚型。液基细胞学、HPV亚型、hTERC基因、c-myc基因任一指标阳性的患者均行阴道镜及病理活组织检查。以病理学结果为金标准,分析液基细胞学、HPV检测、hTERC基因和c-myc基因检测单独筛查对于子宫颈癌筛查的灵敏度和特异性,评价与临床病理结果的相关性。经筛选有117例患者需行阴道镜检查及活检,但有2例主动放弃。所以有115例患者有病理学结果。对病检正常/炎症和CINI者直接随访而不治疗；CINII、CINIII、SCC均采取手术治疗为主,术后6月随访。随访中,26例失访,其中以炎症、全子宫切除患者为主；有89例复诊,并于6个月时对其再次刷取宫颈脱落细胞行TCT、HPV、c-myc、 hTERC检测,有异常时行阴道镜下宫颈活检及组织病理学检查。结果：1、CINI、CINII、CINIII、SCC患者中TCT检测结果的阳性率分别为87.5%、96.4%、100%、100%。随着病理级别的增高,TCT检查结果的阳性率增加。但对不同等级CIN的筛查,没有明显的优越差异(P=0.061)。2、随着病变组织病理学程度的增加,c-myc基因阳性扩增患者病例数增加,c-myc基因阳性扩增率增加,在正常组、CINI组、CINII组、CINIII组、SCC组中c-myc基因扩增阳性患者比率分别为：41.67%,18.75%,39.29%,54.90%,87.50%。结果显示：不同病理级别之间c-myc基因扩增的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。3、病理检测级别为正常、CINI、CINI、CINII、SCC的患者中hTERC的阳性率分别是：33.33%、25%、50%、68.63%、87.50%。随着病变严重程度增加,hTERC基因扩增的阳性率增加。4、随着病理学级别的升高,HPV基因扩增的阳性表达率在正常、CINI、CINII、CINIII、SCC的患者HPV的阳性率分别是：75.00%、68.75%、100.00%、88.24%、87.50%。结果表明：HPV阳性表达在不同病理学级别组中,差异有统计学意义。5、TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因单独检测对宫颈癌及CIN检测的灵敏度分别为86.21%、92.00%、52.9%、64.40%,特异度分别为70.00%、26.70%、70.00%、70.00%。TCT+c-myc、TCT+hTERC、 HPV+c-myc、HPV+hTERC、c-myc+hTERC检测的灵敏度分别为93.50%、95.09%、96.23%、97.15%、83.28%,特异度分别为91.00%、91.00%、78.01%、78.01%、91.00%;TCT+HPV+c-myc、 TCT+HPV+hTERC、TCT+HPV+c-myc+hTERC的灵敏度分别为：99.48%、99.61%、99.81%,特异度分别为：93.40%、93.40%、98.02%。hTERC、c-myc基因单独检测的灵敏度和特异度均不高,但分别与常用检测方法HPV+TCT三联合,其特异度和灵敏度均有较大幅度的增高,较c-myc基因,hTERC基因单独检测及传统的TCT+HPV联合检测在灵敏度方面显示出更大的优越性；四联合的灵敏度和特异度分别高达99.81%和98.02%,但同时检测两个基因加重了患者的经济负担。6、CIN患者中69例行锥切手术,其中3例失访,66例6个月复诊。66例CIN治疗前、后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的检测结果,进行对比分析,得出CIN治疗后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的阳性率明显降低,与对应的治疗前比较,差异均有具有统计学意义。结论：1、C-myc、hTERC基因扩增可能是宫颈癌形成的早期事件,在宫颈癌变的过程中c-myc、hTERC基因可能起着重要的作用,其可作为宫颈癌筛查的分子标志。二者的扩增情况对预测CIN复发或进展有重要参考价值,其可作为CIN治疗后的一种随访手段。2、HPV感染与宫颈上皮内瘤变密切相关。尤其是HPV高危型患者CIN发病率较高,HPV高危型检测在宫颈病变的检查中有重要意义。由于HPV感染率高,特异性太低,与宫颈细胞学检查(TCT)相结合可明显提高宫颈病变的检出率,为目前主要的联合筛查CIN的方法。3、HPV感染与c-my、hTERC基因扩增率成正相关,在宫颈癌前病变中,c-myc、hTERC基因扩增与HPV感染在宫颈癌前病变及宫颈癌的发生发展中起着重要的作用。二者在宫颈病变中的异常表达存在相关性。c-myc、hTERC基因检测与常用检测TCT+HPV联合灵敏度、特异度显示更高,所以认为TCT+HPV+hTERC或TCT+HPV+c-myc为最佳组合。4、FISH技术具有客观、可重复、无创等优点,并且利用宫颈脱落细胞残液对宫颈病变进行筛查,检测c-myc、hTERC基因,可弥补TCT灵敏度差、HPV特异性差的缺点,可作为目前“三阶梯”及HPV检测以外的有力检测方法。5、本研究采用表面等离子共振技术(SPR)对不同宫颈病变的脱落细胞HPV DNA进行检测。HPV阳性表达在不同病理学级别组中,差异有统计学意义。但是,与组织病理学级别没有正相关关系(与文献报道有差异)。这可能与病例数太少或者检测方法有关,有待进一步用SPR技术检测研究。