论文部分内容阅读
同种移植排斥反应是目前器官移植领域所遇到的最大难题。从免疫应答的角度来说，气管是唯一类型的组织移植物，对气管同种移植物进行短期免疫抑制诱导是可能的。前期动物实验结果表明，10-羟基喜树碱（HOPT）和环孢素A（CsA）联合应用对同种小鼠心脏、肾脏移植物急性排斥反应具有明显抑制作用，这样移植器官的组织结构、功能可以正常存在，并且明显减少免疫抑制剂对受体带来的危害。但大剂量的10-羟基喜树碱应用却有毒性反应，为探讨小剂量10-羟基喜树碱（HOPT）和环孢素A联合用药对同种小鼠气管移植物急性排斥反应是否有协同抑制作用，该实验，我们以雄性BALB/c小鼠为供者，雄性C57BL/6小鼠为受者，制作气管移植动物模型。观察急性排斥反应的发生、发展过程。方法：以雄性BALB/c小鼠为供者，雄性C57BL/6小鼠为受者，行同种小鼠气管异体腹腔移植，移植后受者小鼠接受HOPT、CsA治疗或二者联合应用。供体处死后取出整个主气管，分别移植到四组受体小鼠腹腔内大网膜包埋4周后取出，病理检查四组免疫排斥反应的差别。三十二只经过同源移植的动物被随机分成如下4组：①A组（n=8）：没有免疫抑制；②B组（n=8）：<WP=45>以0.015mg10-羟基喜树碱（HOPT）每日腹腔注射组；③C组（n=8）：以0.3mg环孢素A（CsA）每日灌胃组；④D组（n=8）：以0.015mg10-羟基喜树碱（HOPT）每日腹腔注射加0.3mg环孢素A（CsA）每日灌胃组。术后28天，处死所有小鼠，取出气管移植物，评估组织学形态的变化。结果：所有受体小鼠术后存活，无异常表现，刀口、腹腔无感染。病理学结果：大体见：取自处死后的受体小鼠的气管抑制物，A、B、C和D组均见移植气管增粗，管腔严重狭窄。镜下见A组：粘膜完全脱落，软骨坏死，肉芽组织增生明显，大量淋巴细胞和单核细胞浸润，单核细胞主要见于移植气管的粘膜下和外膜部小血管附近以及栓塞的小血管内。B组：粘膜部分脱落，软骨变性，肉芽组织增生较重，中等量淋巴细胞和单核细胞浸润，单核细胞亦主要见于移植气管的粘膜下和外膜部小血管附近以及栓塞的小血管内。C组：粘膜小部分脱落，软骨变性，肉芽组织增生较轻，中等量淋巴细胞和单核细胞浸润，单核细胞亦主要见于移植气管的粘膜下和外膜部小血管附近以及栓塞的小血管内。D组：粘膜小部分脱落，无软骨变性、坏死或溶解、吸收，肉芽组织增生较轻，少量淋巴细胞和单核细胞浸润，单核细胞亦主要见于移植气管的粘膜下和外膜部小<WP=46>血管附近以及栓塞的小血管内。B组与A组比较粘膜脱落，软骨变性、坏死或溶解、吸收，肉芽组织增生，淋巴细胞和单核细胞浸润程度减轻；C组与B组比较粘膜脱落，软骨变性、坏死或溶解、吸收，肉芽组织增生，淋巴细胞和单核细胞浸润程度减轻；D组与A、B、C组比较粘膜脱落，软骨变性、坏死或溶解、吸收，肉芽组织增生，淋巴细胞和单核细胞浸润程度明显减轻。结论：经小剂量HOPT和CsA的联合应用气管移植物均能基本保持了组织结构，主要表现为少量淋巴细胞和单核细胞浸润，表现为轻度排斥反应。而没有免疫抑制、单独应用HOPT或CsA治疗后的气管移植物均不同程度的出现中度排斥反应或重度排斥反应。提示HOPT和CsA联合用药对同种小鼠气管移植物急性排斥反应有协同抑制作用。其机理是，10-羟基喜树碱是从珙桐科植物喜树中提取得到的微量生物碱，长期作为抗癌药物用于临床。近年来，国内外学者研究表明，本品为选择性Ⅰ型拓扑异构酶抑制剂。拓扑异构酶是催化DNA超螺旋结构解旋反应、直接参与或影响DNA复制、转录以及细胞分裂增殖的重要酶类。HOPT可选择性的抑制拓扑异构酶，直接作用于细胞DNA合成期（S期），阻止细胞<WP=47>进入有丝分裂期（M期）。在移植物急性排斥反应期间，抗原刺激下活化T细胞合成和分泌IL-2并表达IL-2Rα，IL-2／IL-2Rα结合导致T细胞的大量增殖进而攻击移植物。HOPT通过抑制DNA复制使IL-2和IL-2Rα合成障碍，阻断T细胞分裂增殖的重要环节，从而使活化T细胞不能增殖，而发生程序死亡或称细胞凋亡或变成克隆无功能（Anergy）细胞。进而减少排斥反应的发生、发展。而公认的有效的免疫抑制剂CsA是作用在T细胞活化过程中，而HOPT和CsA的联合应用可使IL-2基因的转录在TCR／CD3接受抗原刺激后4h之内增加，首先是IL-2基因的活化，然后以DNA为模板转录生成mRNA，mRNA转运到核糖体内，以mRNA的密码调控序列，翻译合成IL-2。在此过程中，CsA通过竞争性抑制Ca2+与CNR的结合，阻断了IL-2基因增强因子的作用，使IL-2基因不能活化。而HOPT的作用发生在IL-2基因活化以后，以DNA为模板而生成mRNA的过程中。在此过程中，首先是DNA超螺旋结构的解旋反应，否则转录将无法进行。此种解旋反应需要拓扑异构酶I的催化，而HOPT则为该酶的抑制剂，直接影响DNA的复制与转录。因此，CsA和HOPT的作用发生在T细胞活化、IL-2合成过程中的两个不同的环节，在此过程中发挥互补性的抑制作用。在气管<WP=48>移植中，术后联合应用小剂量10-羟基喜树碱（HOPT）和环孢素A，减少对受体生理机能的干扰，减轻因移植术后应用免疫抑制剂带来的各种并发症，这一途径是可行的。