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昆虫杆状病毒是潜在的无污染杀虫剂,但是其缓慢的发病致死作用,极大地限制了它作为杀虫剂的应用.杆状病毒的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(egt)基因为病毒复制的非必需基因,缺失egt基因的病毒可以加速宿主昆虫的死亡,提高杀虫效果;而且可在egt基因启动子下游插入标记基因或有用蛋白质基因,有利于重组病毒的筛选和表达产物的加工.该文分析了家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcMNPV)egt启动子及家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyx mandarina)海藻糖酶基因(trehalase)启动子的特性,研究了蜕皮激素(ecdysone)、保幼激素(JH)和滞育激素(DH)对egt基因启动子和trehalase基因启动子活性的调控.1、BmNPV和AcMNPV egt启动子的特性从BmNPV和AcMNPV)基因组DNA扩增出不同长度的egt启动子区段,构建egt启动子控制的荧光素酶基因(luc)报告质粒.瞬时表达分析结果表明:BmNPV和AcMNPV egt启动子具有相似的特性,其转录活性需要病毒因子的反式激活,而且病毒感染后24 h才检测到转录.2、BmNPVhr3增强egt启动子的活性在BmNPV和AcMNPV egt启动子控制的报告基因下游插入BmNPV hr3,构建带hr3的报告质粒.瞬时表达分析显示,在体外和体内BmNPV hr3分别使egt启动子活性分别增加1200-1600和130倍,但egt启动子活性仍需要病毒因子的反式激活,而且在病毒感染后18 h才检测到.3、egt基因启动子的功能区不同长度的BmNPV和AcMNPV egt启动子控制的报告基因表达分析表明,egt翻译起始位点ATG上游-159 bp区段包含启动子的基本结构,但转录活性接近消失;与病毒因子作用的转录调控顺式元件主要存在于翻译起始位点ATG上游-159~-309区段内.4、外源昆虫蜕皮激素和保幼激素对egt基因启动子活性的调控在体外ecdysone对egt启动子活性有负调节作用,0.5μg/ml时作用不明显,而≥1.0μg/ml时明显降低egt启动子活性.相反,在体内每头幼虫注射4-8μgecdysone,egt启动子活性提高约2.6-15倍.JH对egt启动子活性有正调节作用,0.5-2.0μg/ml培养基或50-150μg/ml溶液涂布幼虫体表分别使启动子活性增加0.75-1.5倍和0.76-4.4倍5、家蚕和野桑蚕海藻糖酶基因启动子特性家蚕和野桑蚕trehalase启动子在Bm5和Sf21细胞中都有很低但明显的转录活性,家蚕trehalase启动子在同源的Bm5细胞中的转录活性明显高于在异源的Sf21细胞中的活性.6、滞育激素对家蚕海藻糖酶基因启动子活性的调控在Bm5细胞培养基中,DH浓度13-33 nmol/L范围内都显著增强家蚕trehalase启动子的活性,其中以20-27 nmol/L增强作用最大,提高约为1.3倍;浓度为50 nmol/L时无显著的影响.说明DH对家蚕trehalase启动子的调控呈现明显的剂量效应,源自家蚕卵巢的Bm5细胞系可能存在着DH的受体.