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第一部分 不同浓度的亚甲蓝介导的光动力疗法对铜绿假单胞菌的体外杀伤作用研究目的:研究不同浓度的亚甲蓝(MB)介导的光动力疗法(PDT)对铜绿假单胞菌的体外杀伤作用。方法:以铜绿假单胞菌ATCC9027为实验对象,将其制备成浓度为10~8个/mL的细胞悬浮液,实验分为PDT组、单纯光敏剂组、单纯光照组、空白对照组。(1)PDT组:将铜绿假单胞菌细胞悬浮液分别与不同浓度的MB(光敏剂的终浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L、12.5μmol/L、15μmol/L、17.5μmol/L、20μmol/L)混匀,避光孵育30 min,再予以波长660 nm的红光光源照射,照射时间13 min,能量为10 J/cm~2。(2)单纯光敏剂组:仅加入同PDT组相同浓度的光敏剂MB,不予以任何光照。(3)单纯光照组:不加入光敏剂MB,仅予以同PDT组相同能量的光源照射。(4)空白对照组:不加入光敏剂MB,也不予以任何光照。比较各组处理后铜绿假单胞菌的菌落形成单位计算生存率。结果:在不同浓度的MB(5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L、12.5μmol/L、15μmol/L、17.5μmol/L、20μmol/L)介导下的PDT作用,铜绿假单胞菌的生存率分别为73.6559%、9.8896%、1.2565%、0.1148%、0.0645%、0.0112%、0.0016%,与单纯光敏剂组、单纯光照组、空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);2.5μmol/L的MB介导的PDT,铜绿假单胞菌的生存率为89.5262%,与单纯光敏剂组、单纯光照组、空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在相同光能量条件下,一定浓度范围内,MB介导的PDT对铜绿假单胞菌的杀伤作用随着光敏剂浓度的增高而增强。第二部分 不同光能量对MB介导的PDT对铜绿假单胞菌杀伤疗效的影响目的:研究不同光能量对MB介导的PDT对铜绿假单胞菌杀伤疗效的影响。方法:以铜绿假单胞菌ATCC9027为实验对象,将其制备成浓度为10~8个/mL的细胞悬浮液,实验分为PDT组、空白对照组。(1)PDT组:将铜绿假单胞菌细胞悬浮液与光敏剂MB(终浓度为20μmol/L)混匀,避光孵育30 min,再予以波长660 nm的红光光源分别照射0 min、2.6 min、5.2 min、10.4 min、20.8 min(对应的能量分别为0 J/cm~2、2 J/cm~2、4 J/cm~2、8 J/cm~2、16 J/cm~2)。(2)空白对照组:不加入光敏剂MB,也不予以任何光照。比较各组处理后铜绿假单胞菌的菌落形成单位计算生存率。结果:在相同的光敏剂浓度(20μmol/L)参数下时,不同能量(0 J/cm~2、2 J/cm~2、4 J/cm~2、8 J/cm~2、16 J/cm~2)的红光光源照射于铜绿假单胞菌,铜绿假单胞菌的生存率分别为79.25%、38.94%、3.562%、0.03156%、0.0001523%。能量为16 J/cm~2时,20μmol/L的MB介导的PDT作用于铜绿假单胞菌,其菌落数下降约6个对数级,也就是说铜绿假单胞菌几乎被完全杀死。结论:在MB浓度相同的条件下,一定光能量范围内,MB介导的PDT对铜绿假单胞菌的杀伤作用随着光能量的增加而增强。第三部分碘化钾联合MB介导的PDT对铜绿假单胞菌的杀伤作用研究目的:研究碘化钾(KI)对MB介导的PDT对铜绿假单胞菌的抗菌活性是否具有增强作用。方法:以铜绿假单胞菌ATCC9027为实验对象,将其制备成浓度为10~8个/mL的细胞悬浮液,实验分为MB-PDT组、KI+MB-PDT组、空白对照组。(1)MB-PDT组:仅在铜绿假单胞菌细胞悬浮液中加入光敏剂MB(终浓度为7.5μmol/L)混匀,不加入KI,避光孵育30 min,再予以波长660 nm的红光光源照射,照射时间13 min,能量为10 J/cm~2;(2)KI+MB-PDT组:在铜绿假单胞菌细胞悬浮液中分别加入不同浓度的KI(终浓度分别为1 mmol/L、2 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)和光敏剂MB(终浓度为7.5μmol/L),避光孵育30 min,再予以波长660 nm的红光光源照射,照射时间13 min,能量为10 J/cm~2;(3)空白对照组:铜绿假单胞菌细胞悬浮液不加入KI和光敏剂MB,不予以任何光照。比较各组处理后铜绿假单胞菌的菌落形成单位计算生存率。结果:在光能量10J/cm~2的条件下,不同浓度的KI(1 mmol/L、2 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)联合7.5μmol/L的MB介导下的PDT作用,铜绿假单胞菌的生存率分别为9.589%、6.452%、0.2258%、0.0006452%,其中10 mmol/L的KI联合7.5μmol/L的MB介导的PDT使铜绿假单胞菌的菌落数下降约5个对数级,与MB-PDT组、空白对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:KI具有增强MB-PDT对铜绿假单胞菌的杀伤作用。