辛德毕斯（Sindbis virus, SINV）病毒隶属于披膜病毒科（Togavirudea）甲病毒属（Alphavirus），感染人类可引发发热、倦怠、头痛、关节痛和皮疹等症状，被称为“辛德毕斯综合热”。SINV在形态、结构、复制、翻译及发病机理等方面均集中体现了动物病毒的特征，并且其为温和型病原体，操作安全性高，目前已作为模型病毒被广泛应用于动物病毒基本规律的研究。SINV在感染BHK、Vero等哺乳动物细胞的同时，也可以感染C6/36等昆虫细胞，但该病毒在活体动物中的感染路径和组织嗜性并不清楚，进一步探讨其感染的分子机制有赖于可视化重组病毒的制备。脑内接种SINV可致3日龄乳鼠死亡，而高日龄小鼠在接种SINV后可自愈。近期研究表明，经过传代培养或定点突变后的筛选病毒可使高日龄小鼠死亡。但是SINV神经毒力株特异性的分子机理还有待于进一步研究。XJ-160病毒是上世纪90年代从新疆采集的蚊虫标本分离到的一株SIN病毒。本课题组多年来针对其开展了一系列工作，包括全基因组序列测定和分析，感染性克隆构建等。为了进一步探讨辛德毕斯病毒的组织嗜性，本研究以XJ-160病毒感染性克隆为分子基础，通过融合PCR、体外转录和脂质体转染等方法构建新型增强型绿色荧光蛋白（Enchanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因标记的SINV，并利用标记病毒进行了细胞易感性研究。同时，为了探讨决定SINV神经毒力日龄依赖性的分子机制，本研究还通过体外定点突变等方法对其E2基因上的关键毒力位点进行突变，并考察E2基因定点突变SINV的神经毒力特征。本研究利用XJ-160病毒反向遗传学技术平台，获得了EGFP标记的SINV和4株突变病毒。恢复病毒的空斑形态和增殖趋势均与亲本病毒相似。利用标记病毒进行细胞嗜性研究，结果发现SINV对肾癌细胞具有特异性侵染能力，为肾癌治疗带来了新的契机，对于开发相应的肿瘤治疗手段具有重要的指导意义。同时，乳鼠神经毒力实验结果提示，E2基因上关键位点突变改变了XJ-160病毒致小鼠死亡的日龄，SINV致小鼠死亡的分子机理和确切的结果还需进一步加以验证。本研究制备的报告基因标记SINV具有可视化特征，可广泛应用于抗病毒药物筛选、病毒在活体动物内感染路径观察等研究。而E2基因定点突变病毒的构建也为进一步阐明SINV致小鼠死亡的神经毒力的分子机理奠定了基础。