血液肿瘤骨髓微环境中纤维连接蛋白介导的化疗耐药模型的建立

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【目的】1.骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal cells,BMSCs)的分离及鉴定。2.检测骨髓基质细胞是否表达纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)。3.模拟体内肿瘤细胞与骨髓基质中纤维连接蛋白接触模型,验证纤维连接蛋白是否介导了血液肿瘤微小残留病灶的产生,即肿瘤耐药。【方法】1.收集血液科非恶性肿瘤患者骨髓液标本,梯度密度离心后,通过贴壁法培养骨髓基质细胞。直接在显微镜下观察分离培养的BMSCs细胞形态,应用流式细胞仪检测BMSCs的细胞标志。2.细胞免疫荧光法检测BMSCs表达Fn的表达情况。3.将包被有纤维连接蛋白的孔板与K562细胞共培养,MSCs细胞与K562细胞共培养,分别与伊马替尼、柔红霉素作用,然后通过流式细胞仪检测K562细胞周期阻滞和细胞凋亡情况。【结果】1.分离培养的BMSCs表面标志: CD44、CD105表达阳性(PE标记);CD19、CD34和CD45表达阴性(FITC标记)。2. MSCs细胞胞浆内表达Fn,且可以分泌Fn。3. Fn诱导K562细胞发生G1期阻滞,凋亡率降低。【结论】1.分离培养了BMSCs可以用于建立Fn介导的粘附耐药模型。分离培养的BMSCs分子标记与国际相关研究一致,可用于后期研究。2. BMSCs细胞胞浆内表达Fn,且可以分泌Fn。3.BMSCs细胞可能是通过分泌Fn蛋白诱导血液肿瘤细胞粘附耐药的。
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