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血管生成素（angiogenin）是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的血管生成因子（angiogenic factor）,且其促血管生成能力非常强。Angiogenin是核糖核酸酶超家族中的一员,是目前已知的所有血管生成因子中独具核糖核酸酶活性的因子。大量研究表明,angiogenin在不同组织类型的肿瘤形成中具有必要的作用,与肿瘤的快速生长、转移、分期及预后均有密切关系。而且,angiogenin在多种肿瘤患者血清中表达水平均升高。因此在肿瘤研究中,血清angiogenin表达水平成为一种肿瘤特异性的标志物,它对肿瘤发生的及时诊断和大范围人群的肿瘤筛查有重要意义。 在本研究中,利用RT-PCR方法从培养的人黑色素瘤细胞系A375中扩增得到了人angiogenin cDNA片段,测序正确后克隆入表达载体pET28-α（+）中并转化于E.coli BL21宿主菌中。经IPTG诱导,表达了N端融合His6的angiogenin融合蛋白。利用His6与过渡态金属离子Ni2+高亲合力结合的性质,经镍柱纯化,获得了高纯度的His6-ANG融合蛋白。Westem blot分析显示纯化的重组蛋白能够特异结合angiogenin抗体,具有较强的免疫原性。纯化的重组蛋白免疫家兔,产生了高效价的多克隆抗体。 利用得到的重组蛋白和多克隆抗体通过竞争ELISA方法对肿瘤患者血清中angiogenin表达水平进行检测。检测结果显示对肝癌、胃癌、血癌有较好的效果,说明对肿瘤患者血清中angiogenin水平的检测有可能成为快速、高效、廉价的肿瘤诊断方法。