【摘 要】
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目的:克隆和重组人心肌热休克蛋白B1（heat shock protein B1,HSPB1）基因,观察HSPB1高表达对大鼠心肌细胞氧化应激的保护作用并阐明其可能机制。 方法:1.将RT-PCR获得的人心
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目的:克隆和重组人心肌热休克蛋白B1（heat shock protein B1,HSPB1）基因,观察HSPB1高表达对大鼠心肌细胞氧化应激的保护作用并阐明其可能机制。 方法:1.将RT-PCR获得的人心肌HSPB1基因全长cDNA,重组入真核表达载体pCDNA3.1+。2.将重组体pCDNA3.1+/HSPB1瞬时转染293T细胞株进行真核表达活性测定,随后转染大鼠心肌细胞系H9c2,经G418选择性培养获得稳定转染细胞系。3.以稳定转染细胞系H9c2（HSPB1 H9c2）和空载体转染的H9c2（CON）为实验对象,不同浓度H2O2刺激后,倒置光学显微镜观察细胞形态学变化,并观察HSPB1高表达对高浓度H2O2诱导的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放的影响和低浓度H2O2诱导的细胞凋亡的影响。4.用荧光探针DCFH-DA和JC-1分别检测HSPB1 H9c2和CON细胞中内源性活性氧自由基产生的量及线粒体内膜跨膜电位水平。 结果:1.成功构建重组体pCDNA3.1+/HSPB1,经酶切分析,得到含有630bp目的条带的阳性克隆。2.Western Blot显示:pCDNA3.1+/HSPB1在293T和H9c2中表达良好。3.HSPB1高表达
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