桑叶功能成分的分离及其水提物对Ⅰ-糖尿病小鼠治疗作用的研究

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论文以桑叶为研究对象,研究其功能成分的提取分离工艺和桑叶水提物对链脲霉素(STZ)诱导的Ⅰ-糖尿病小鼠的治疗作用,所得结果为桑叶功能成分的综合开发利用提供了理论支撑。主要包括以下几个方面:1、通过实验建立了桑叶中白藜芦醇的HPLC检测方法和1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,简称DNJ)的HPLC-柱前衍生法测定方法,并对方法的稳定性、重复性和精密度等进行了验证;通过研究提取溶剂、提取时间、提取温度等单因素对白藜芦醇、DNJ提取的影响,应用正交设计分别优化了桑叶白藜芦醇、DNJ的提取工艺条件;研究了原料质量浓度,提取温度,提取时间,提取次数等单因素对多糖提取率的影响,并利用正交设计和响应面实验设计进一步优化其提取的工艺条件;2、通过应用硅胶柱层析对白藜芦醇粗提物进行纯化,获得了含量为98.3%的白藜芦醇;比较了7种大孔树脂和聚酰胺对桑叶DNJ的纯化效果,并筛选出合适的吸附剂;对初步纯化后的DNJ使用阳离子交换树脂进行精制,通过研究D102对1-脱氧野尻霉素的交换容量和洗脱曲线,使经过二次柱色谱分离的DNJ含量达到80%;3、为提高桑叶中白藜芦醇的利用率,研究利用微生物与桑叶原料进行带渣发酵,并对发酵条件进行了优化,使菌体的胞外酶能够转化桑叶白藜芦醇苷生成白藜芦醇,提高了从桑叶中提取白藜芦醇的收率,在桑叶深加工中尚属首次;4、为了研究桑叶水提物对Ⅰ-糖尿病小鼠的治疗的药理效果,通过腹腔注射链脲霉素(STZ)诱导Ⅰ-型糖尿病小鼠模型,采用桑叶水提物灌胃进行治疗,通过测定糖尿病相关的10项生化指标,研究桑叶水提物对STZ诱导的糖尿病小鼠治疗的药理功效,为桑叶功能成分的开发提供了实验和理论依据;5、通过对桑叶水提物治疗后的Ⅰ-糖尿病小鼠病理标本进行分析,结合糖原染色法(PAS)和细胞凋亡检测(TUNEL)法,研究桑叶水提取物对糖尿病小鼠肝、肾、胰腺细胞水平的影响,为其应用于临床防治糖尿病及其并发症提供实验和理论依据,结果表明一定浓度的桑叶水提物能够修复Ⅰ-糖尿病小鼠胰岛细胞,促进胰岛素的正常分泌;6、通过对桑叶提取物体外抗糖基化和自由基的活性进行研究,发现了桑叶提取物具有一定抗氧化能力。
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