论文部分内容阅读
大肠杆菌(Escherichia coli)是生物化学与分子生物学和遗传学研究的重要单细胞模式生物。对大肠杆菌DNA复制、细胞周期以及其基因调控的深入研究对真核细胞乃至癌细胞的研究具借鉴作用。复制起始蛋白DnaA也是转录因子,通过结合在启动子区域的DnaA-box来调控dnaA、mioC和nrdAB等基因和操纵子的表达。
本文以探讨DnaA蛋白对细胞周期的调控作用为长远目标,研究了DnaA对uvrB、gyrA和seqA基因表达的调控作用。用染色体基因一步失活法,把报告基因lacZ插入在染色体上靶基因seqA、gyrA和uvrB的下游,构建了启动子活性分析细胞WRH10、WRH28和WRH37。同时,把seqAp、gyrAp、uvrBp3、uvrBp1-2启动子分别插入在pTAC3953质粒lacZ基因起始密码子前,得到了启动子活性分析质粒。在不同DnaA条件下,通过Miller法测定β半乳糖苷酶活性来研究DnaA对这些基因的表达调控。结果发现降低DnaA蛋白对DnaA-box的结合能力或可用量都提高了uvrB基因的表达,而额外DnaA却降低了其表达,表明DnaA直接调控uvrB基因表达。在dnaA345突变体中,包含LexA结合位点的uvrBp1-2启动子活性明显比uvrBp3高,这可能是因为LexA和DnaA协同调控uvrB基因的表达。另外,DnaA345突变蛋白引起染色体gyrA基因表达的提高,而且gyrA启动子在质粒上的活性也受DnaA影响,表明DnaA可能参与调节该基因的表达。然而,DnaA蛋白对seqA基因的表达没有明显影响。总之,DnaA蛋白参与调控uvrB和gyrA基因表达。