背景:动脉粥样硬化(artherosclerosis, AS),是严重危害人类生命健康的的慢性疾病,可引起冠心病、脑血管意外等心脑血管疾病。传统的心血管的防治手段比较有限,同时,血管介入治疗术后的再狭窄以及外科的CABG术后移植血管病也是临床上堕待解决的难题。研究其致病因素和病理机制,并据此施以相应的措施,是预防和治疗AS、防治急性心脑血管事件,提高血管介入及外科手术疗效的根本。目前认识到,本病的病因复杂,是由多种因素作用于不同环节,导致受累动脉的病变从内膜开始,先后有多种病变合并存在,包括有脂质和复合糖类积聚、纤维组织增生和钙质沉积,并有动脉中层的逐渐退变,继发性病变尚有斑块内出血、斑块破裂及局部血栓形成。对本病的发病机制,曾有多种学说从不同的角度来阐述,包括脂质浸润学说、血栓形成学说、平滑肌单克隆学说、氧化学说及同型半胱氨酸学说等等。近年来越来越多的研究资料表明,AS是一个包含大量炎症介质参与的炎症性疾病,是动脉内膜对多种损伤病因(包括血流机械动力学,高胆固醇血症,高同型半胱氨酸血症,感染,自身免疫等)作出的炎症性反应的结果。不管是AS的形成、发展,还是介入治疗与CABG术后的血管狭窄,根本的病理基础都是一个血管损伤后修复的炎症过程,是内皮修复及内膜增殖的对立平衡。近年研究提供大量证据表明炎症、免疫机制参与A S的发生、发展和斑块不稳定、破裂、出血以及继发血栓形成,导致急性心脑血管事件的过程。炎症因子在炎症的发生、发展中发挥了至关重要的作用,它们直接参与并调节AS的炎症过程,大量促炎因子升高,抗炎因子相对或绝对下降,使机体处在一个持续的免疫失衡的炎症状态,影响A S的发生、发展和预后。据此,抗炎干预和免疫调节成为AS防治的新方向。甲氨喋呤(MTX)作为一线治疗类风湿性关节炎的药物,具有良好的抗炎、免疫调节和抗增殖作用,其满意的效益/毒性比已经得到证实。但其在非特异性炎性病变的AS、冠心病中是否有类似作用,国内外研究很少,尚不清楚。目的:探讨甲氨喋呤对兔动脉粥样硬化模型的干预效果,以及对外周血炎症介质表达的调节作用及其可能的作用机制。方法:采用高脂饲料加腹主动脉球囊剥脱术建立兔动脉粥样硬化模型,新西兰白兔随机分为六组:空白组,假手术组,模型对照组,氟伐他汀组(5mg/kg,1次/天),甲氨喋呤低浓度组(0.3mg/kg,3次/W),甲氨喋呤高浓度组(0.6mg/kg,3次/W),模型对照组及假手术组以生理盐水干预,共干预九周。治疗结束后每组动物取一完整血管纵行剖开行油红O大体标本染色,HE染色观察光镜下血管形态和结构的变化,免疫组织化学染色法检测血管中ICAM-1和VCAM-1的含量,全自动生化仪测血清血脂生化及超敏C反应蛋白,ELISA法测定外周血中TNF-α、IL-6、IL-1、IL-10、MCP-1的含量,West Blot法检测血管组织细胞核内NF-κB p65蛋白表达及含量变化。结果:1.血脂生化结果显示:与空白组比较,假手术组CHO、LDL-C明显增高(P<0.01),模型组CHO、LDL-C也较空白组明显增高(P<0.01),假手术组与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。与模型组比较,氟伐他汀治疗后CHO、LDL-C下降(P<0.05)。甲氨喋呤(低、高剂量组)治疗后,CHO、LDL-C水平与模型组无统计学差异(P>0.05)。与空白组比较,假手术组和模型组TRG有增高趋势,但未达到统计学差异(P>0.05)。假手术组和模型组之间TRG也无统计学差异(P>0.05)。与模型组比较,氟伐他汀治疗后TRG有下降趋势,但未达到统计学差异(P>0.05)。甲氨喋呤(低、高剂量组)治疗后,TRG水平与模型组无统计学差异(P>0.05)。与空白组比较,假手术组和模型组HDL-C明显增高(P<0.01),假手术组与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。与模型组比较,氟伐他汀治疗后HDL-C无统计学差异(P>0.05)。甲氨喋呤(低、高剂量组)治疗后,HDL-C水平与模型组无统计学差异(P>0.05)。血清hs-CRP测定结果显示:与空白组比较,假手术组hs-CRP无统计学差异(P>0.05),模型组hs-CRP较空白组明显增高(P<0.01);模型组hs-CRP较假手术组明显增高(P<0.01);与模型组比较,氟伐他汀治疗后hs-CRP明显下降(P<0.01)。甲氨喋呤(低、高剂量组)治疗后,hs-CRP水平也较模型组明显下降(P<0.01)。氟伐他汀组与甲氨喋呤(低、高剂量组)无统计学差异(P>0.05);甲氨喋呤低、高剂量组间也无统计学差异(P>0.05)。2.油红O大体标本染色显示:与空白组比较,假手术组动脉粥样硬化斑块面积和厚度显著增加;与假手术组比较,模型对照组斑块面积和厚度增加;与模型对照组比较,氟伐他汀组斑块面积和厚度均下降;甲氨喋呤治疗组与模型对照组相比,斑块面积和厚度有下降;氟伐他汀组与甲氨喋呤治疗组治疗效果比较,无统计学意义,氟伐他汀和甲氨喋呤治疗后,血管斑块的面积和厚度均可减轻。3. HE染色显示:模型对照组较假手术组血管狭窄程度增加,血管壁钙化明显,内膜增殖明显,内弹力板破坏,平滑肌细胞增殖、迁移,炎症细胞浸润明显增加;氟伐他汀治疗后血管狭窄减轻,内膜无明显增殖,内弹力板较连续,平滑肌细胞增殖、迁移不明显,炎症细胞浸润明显减少(P<0.01);甲氨喋呤组(高、低剂量组)与模型组比较,血管狭窄程度,血管壁钙化,内膜增殖,平滑肌增殖迁移均减轻,尤其内膜增殖明显减轻(P<0.05);氟伐他汀组较甲氨喋呤组治疗动脉粥样硬化缓解程度更大,但未达到统计学意义(P>0.05)。其余无明显变化。4.免疫组织化学染色显示:空白组血管组织中未见明显ICAM-1和VCAM-1的阳性细胞;假手术组和模型组ICAM-1和VCAM-1的阳性细胞增加(P均<0.01);模型对照组较假手术组血管组织中ICAM-1和VCAM-1的阳性细胞计数均增加(P均<0.01);氟伐他汀治疗后与模型对照组相比ICAM-1和VCAM-1明显降低(P均<0.05);甲氨喋呤治疗后与模型对照组相比ICAM-1和VCAM-1明显降低(P<0.05),不同浓度药物组之间无明显差异(P>0.05);氟伐他汀组与甲氨喋呤组比较,无统计学意义。5. ELISA法检测家兔血清细胞因子浓度显示:模型对照组较假手术组MCP-1含量升高(P<0.05),氟伐他汀治疗后可降低MCP-1含量(P<0.05);甲氨喋呤治疗后MCP-1含量降低,低、高浓度组均有统计学意义(P均<0.05),低、高浓度组组间无统计学意义(P>0.05);氟伐他汀组与甲氨喋呤组无统计学差异(P>0.05)。模型对照组较假手术组IL-1β含量升高(P<0.05),氟伐他汀治疗后可降低IL-1β含量(P<0.05);甲氨喋呤治疗后IL-1β含量降低,低、高浓度组均有统计学意义(P均<0.05),低、高浓度组组间无统计学意义(P>0.05);氟伐他汀组与甲氨喋呤组无统计学差异(P>0.05)。模型对照组较假手术组IL-6含量升高(P<0.05),氟伐他汀治疗后可降低IL-6含量(P<0.05);甲氨喋呤治疗后IL-6含量降低,低、高浓度组均有统计学意义(P<均0.05),低、高浓度组组间无统计学意义(P>0.05);氟伐他汀组与甲氨喋呤组无统计学差异(P>0.05)。模型对照组较假手术组TNF-α含量显著升高(P<0.05),氟伐他汀治疗后可显著降低TNF-α含量(P<0.01);甲氨喋呤治疗后TNF-α含量降低,低、高浓度组均有统计学意义(P<0.05),低、高浓度组组间无统计学意义(P>0.05);氟伐他汀组与甲氨喋呤组无统计学差异(P>0.05)。模型对照组较假手术组IL-10含量显著增加(P<0.05),氟伐他汀治疗IL-10含量无明显变化(P>0.05);甲氨喋呤(低、高剂量组)治疗IL-10含量无统计学差异(P>0.05),低、高剂量组组间无统计学差异(P>0.05);甲氨喋呤组较氟伐他汀组IL-10未达到统计学差异(P >0.05)。6.氟伐他汀和甲氨喋呤对血管组织细胞核内NF-κB含量的影响:模型对照组较假手术组核内NF-κB的的表达显著增高(P<0.01);氟伐他汀治疗后可降低核内NF-κB的表达(P<0.05),甲氨喋呤治疗后核内NF-κB的表达下降,低、高剂量组均有统计学意义(P均<0.05);低、高剂量组间无统计学差异(P>0.05);氟伐他汀组和甲氨喋呤组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:甲氨喋呤和氟伐他汀对兔动脉粥样硬化模型外周血中炎性细胞因子具有广泛的调节作用,能够下调炎症因子,对斑块的形成和发展有抑制作用,使血管狭窄减轻,内膜增殖明显减轻,平滑肌细胞增殖、迁移减轻,炎症细胞浸润明显减少;甲氨喋呤和氟伐他汀可能通过抑制NF-κB通路的活化来发挥非特异性的抗炎、免疫调节和抗增殖作用,从而对斑块的形成和发展有抑制作用。此外,氟伐他汀能明显降低兔动脉粥样硬化模型外周血的血脂,发挥抗炎外的调脂作用,对动脉粥样硬化的发生、发展有较强的抑制作用,而甲氨喋呤对兔动脉粥样硬化模型外周血的血脂无影响。