目的：本项研究通过体外实验，模拟日光中紫外线照射，探讨光老化细胞模型的有效造模方法，通过研究在皮肤光老化过程中人角质形成细胞对真皮成纤维细胞影响的作用机制，探讨相关炎症因子和p38MAPK信号转导通路在两种细胞间相互影响中的作用，并研究绞股蓝总皂苷在防治皮肤光老化过程中的作用机制，以期对绞股蓝总皂苷防治皮肤光老化有更加全面充分的认识。材料与方法：本研究采用UVA光源照射人真皮成纤维细胞制备光老化细胞模型。将成纤维细胞通过复苏、传代至1×104个/ml时进行复制，使用自制紫外线照射装置制备光老化细胞模型，使用UVA光源照射（365nm UVA灯管5根并排照射，距离15cm），根据公式：UV剂量=UV辐照强度×时间，进行照射剂量计算得UVA的照射剂量为36J/cm2。将角质形成细胞分为空白对照组（A组）、UVB模型组（B组）、空白血清组（C组）、含药血清组（D组），除A组外，其余组施加UVB照射，照射剂量为35mJ/cm2。之后制备绞股蓝总皂苷含药血清，根据Meeh-Rubner氏公式计算大鼠绞股蓝总皂苷颗粒给药量为160mg/（Kg·d），按此剂量将绞股蓝总皂苷颗粒溶于生理盐水对大鼠进行灌胃处理，每日一次，共灌胃7天，第7天正常灌胃，于1h后，经腹主动脉取血，制备绞股蓝总皂苷含药血清加入D组，C组空白血清组以等量生理盐水给予大鼠灌胃，血清采集方法同D组。用Elisa方法检测A-D组角质形成细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-）的水平。将成纤维细胞分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组。除Ⅰ组外，其余组施加UVA照射，之后将角质形成细胞A-D组的培养上清液分别加入成纤维细胞Ⅲ-Ⅵ组中。应用RT-PCR法和Western blotting法检测Ⅰ-Ⅵ组成纤维细胞中p38MAPK、c-Jun、c-Fos、MMP-1的mRNA和蛋白表达。结果：1HSF细胞形态学变化成纤维细胞在UVA照射后均出现光老化典型性特征改变。细胞融合度降低，边缘模糊，出现不规则样变等。2光老化模型制备成纤维细胞光老化模型制备的辐照剂量没有金标准，故采用检测细胞OD值的方法，确定最大量效比的位点，最终确定UVA的照射剂量为36J/cm2。采用自制模拟紫外线灯架装置照射成纤维细胞的方法可以成功建立细胞的光老化模型，同时这种方法具有经济、简单和可操作性。3角质形成细胞Elisa方法检测结果：空白对照组角质形成细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-呈低水平表达。（1）IL-1β水平：与空白对照组比较，UVB模型组细胞中IL-1β表达水平显著上调（P＜0.01）；与UVB模型组比较，含药血清组细胞中IL-1β含量显著下调（P＜0.01）；与空白血清组比较，含药血清组细胞中IL-1β含量显著下调（P＜0.01）。（2）IL-6水平：与空白对照组比较，UVB模型组细胞中IL-6表达水平显著上调（P＜0.01）；与UVB模型组比较，含药血清组细胞中IL-6含量显著下调（P＜0.01）；与空白血清组比较，含药血清组细胞中IL-6含量显著下调（P＜0.01）。（3）TNF-水平：与空白对照组比较，UVB模型组细胞中TNF-表达水平显著上调（P＜0.01）；与UVB模型组比较，含药血清组细胞中TNF-含量显著下调（P＜0.01）；与空白血清组比较，含药血清组细胞中TNF-含量显著下调（P＜0.01）。4成纤维细胞p38MAPK检测结果：正常成纤维细胞均有p38MAPK mRNA和蛋白的表达。与Ⅰ组比较，Ⅱ组细胞p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P＜0.01），有统计学差异；与Ⅱ组比较，Ⅳ组p38MAPK mRNA和蛋白的表达上调（P＜0.01），有统计学差异；与Ⅱ组比较，Ⅲ组p38MAPK mRNA表达的差异不显著（P＞0.05），Ⅲ组p38MAPK蛋白的表达呈显著性下调（P＜0.05）；与Ⅳ组比较，Ⅵ组p38MAPK mRNA和蛋白的表达均下调（P＜0.01），有统计学差异；与Ⅳ组比较，Ⅴ组p38MAPK mRNA和蛋白的表达差异均不显著（P＞0.05）。5成纤维细胞c-Jun检测结果：正常成纤维细胞均有c-Jun mRNA和蛋白的表达。与Ⅰ组比较，Ⅱ组细胞c-Jun mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P＜0.01），有统计学意义；与Ⅱ组比较，Ⅳ组c-Jun mRNA和蛋白的表达上调（P＜0.01），有统计学意义；与Ⅱ组比较，Ⅲ组c-Jun mRNA和蛋白的表达均无显著性差异（P＞0.05）；与Ⅳ组比较，Ⅵ组c-Jun mRNA和蛋白表达均下调（P＜0.01），有统计学意义；与Ⅳ组比较，Ⅴ组c-Jun mRNA和蛋白的表达均无显著性差异（P＞0.05）。6成纤维细胞c-Fos检测结果：正常成纤维细胞均有c-Fos mRNA和蛋白的表达。与Ⅰ组比较，Ⅱ组细胞c-Fos mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P＜0.01)，有统计学意义；与Ⅱ组比较，Ⅳ组c-Fos mRNA和蛋白表达上调（P＜0.01)，有统计学意义；与Ⅱ组比较，Ⅲ组c-Fos mRNA和蛋白表达水平均无显著性变化（P＞0.05）；与Ⅳ组比较，Ⅵ组c-Fos mRNA和蛋白的表达均下调(P＜0.01)，有统计学意义；与Ⅳ组比较，Ⅴ组c-Fos mRNA和蛋白的表达差异不显著（P＞0.05）。7成纤维细胞MMP-1检测结果：正常成纤维细胞均有MMP-1mRNA和蛋白的表达。与Ⅰ组比较，Ⅱ组细胞MMP-1mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P＜0.01），差异有显著性；与Ⅱ组比较，Ⅳ组MMP-1mRNA和蛋白的表达上调（P＜0.01），差异有显著性；与Ⅱ组比较，Ⅲ组MMP-1mRNA表达差异不显著（P＞0.05），Ⅲ组MMP-1蛋白的表达呈显著性下调（P＜0.05）；与Ⅳ组比较，Ⅵ组MMP-1mRNA和蛋白的表达下调（P＜0.01），差异有显著性；与Ⅳ组比较，Ⅴ组MMP-1mRNA和蛋白表达差异不显著（P＞0.05）。结论：1在体外光老化细胞的实验研究中，通过自制紫外线照射装置制备光老化模型是一种经济、简便的方法，成纤维细胞的照射剂量为36J/cm2。2UVB照射可以促使角质形成细胞释放炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-。3UVA照射激活成纤维细胞p38MAPK信号转导通路，使c-Fos和c-Jun提高，形成二聚体，进而上调MMP-1的表达，进一步加剧p38MAPK信号转导通路的表达。4角质形成细胞对成纤维细胞在光老化过程中的可能影响机制之一是角质形成细胞释放的炎症因子以旁分泌方式促进成纤维细胞p38MAPK信号转导通路的激活。5绞股蓝总皂苷防治皮肤光老化的可能作用机制之一是绞股蓝总皂苷可以降低角质形成细胞炎症因子的释放，进而降低角质形成细胞通过旁分泌机制对成纤维细胞p38MAPK信号转导通路相关基因和蛋白的影响。6绞股蓝总皂苷可以直接有效抑制成纤维细胞p38MAPK信号转导通路相关基因和蛋白的表达。这可能是绞股蓝总皂苷防治皮肤光老化的另一作用机制。