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目的:Hedgehog信号通路在急性胰腺炎中发挥重要作用,但其下游的细胞因子及具体机制尚不十分清楚。本实验主要是通过雨蛙素诱导小鼠急性胰腺炎并激活Hedgehog信号通路,从细胞因子芯片中筛选出变化比较明显的细胞因子,并从体内和体外实验两个方面进行验证。方法:取30只C57小鼠,随机分为三组:对照组、急性胰腺炎组、抑制组。(1)取胰腺组织进行病理切片和血清淀粉酶检测来验证模型建立成功。用RT-q PCR、Western blot、免疫组化等方法对Hedgehog信号通路中的Shh、Gli2信号表达进行检测。(2)体外培养小鼠胰腺腺泡细胞266-6,过表达Gli2之后用细胞因子芯片筛选出变化明显的细胞因子并用RT-q PCR在体外进行验证。(3)用Gant61(Gli家族特异性抑制剂)抑制Gli2后,取小鼠胰腺组织作病理切片,取小鼠血清行Elisa检测对筛选出的细胞因子进行体内验证。结果:(1)急性胰腺炎组和抑制剂组与对照组相比较,淀粉酶水平明显升高(P<0.05),HE染色急性胰腺炎组较对照组胰腺腺泡细胞明显水肿,细胞体积增大;(2)用RT-q PCR、Western blot、免疫组化等方法来检测Shh、Gli2表达,结果与对照组相比较,急性胰腺炎组各组织(胰腺、肺、肝、小肠、肾)中Shh、Gli2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且Gli2主要表达于胰腺腺泡细胞、肺泡上皮细胞、肝实质细胞、小肠黏膜细胞、肾小管上皮细胞等细胞的细胞质内;(3)体外培养小鼠胰腺腺泡细胞266-6,过表达Gli2之后用细胞因子芯片筛选出变化比较明显的细胞因子,如IFN-γ、Fasl、IL-6、G-csf、Cxcl9和Tnfr1a,然后用RT-q PCR进行验证,过表达Gli2组中IFN-γ、Fasl、IL-6表达较Vector组明显下降,过表达Gli2组中G-csf、Cxcl9、Tnfr1a表达较Vector组升高,其差异有统计学意义(P<0.05);(4)再从体内进行验证,用Gant61抑制Gli2之后,作胰腺Gli2蛋白的western blot,结果发现抑制组中Gli2蛋白表达较急性胰腺炎组和对照组降低,表明Gant61抑制有效,然后作胰腺组织病理损伤评分,结果发现抑制组中胰腺病理损伤评分高于急性胰腺炎组和对照组,随后对上述细胞因子进行Elisa检测,发现抑制剂组中IFN-γ、Fasl、IL-6表达较对照组、急性胰腺炎组均升高(P<0.05),G-csf、Cxcl9、Tnfr1a在急性胰腺炎组中与对照组比较明显升高(P<0.05),而抑制剂组中G-csf、Cxcl9、Tnfr1a表达较急性胰腺炎组和对照组明显降低(P<0.05)。结论:1.在雨蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎中,Shh-Gli2信号轴参与了胰腺的损伤及肺、肝、小肠、肾等组织的炎症过程。2.Gli2介导细胞因子IFN-γ、Fasl、IL-6、G-csf、Cxcl9和Tnfr1a参与了对急性胰腺炎的调控过程。