基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用，从而达到治疗疾病目的。目的基因、基因转移和基因表达是基因治疗的三大要素，基因治疗的成功，需要三者完美的结合。很多治疗性蛋白质由多个亚基组成，体内如何表达这类蛋白质是基因治疗中的一个难题。通常采用的方法有两种，一种是用两个启动子分别控制两个亚基基因的表达，另一种是将两个亚基的基因用内部核糖体结合位点（IRES）连接起来，由一个启动子控制。它们各自均存在着一定的缺陷，有待于进一步完善。 2型腺伴随病毒（adeno-associated virus type 2，AAV-2）是一种微小病毒科的缺陷型病毒，具有对人体不致病、可感染处于分裂期和非分裂期的细胞和能介导外源基因长期稳定表达等优点。经过改造得到的重组腺伴随病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）载体是一种比较理想的基因转移载体，有望用于多种人类疾病的基因治疗。本研究利用多个rAAV载体可以同时感染一个宿主细胞的特点，分别以人白细胞介素12（human interleukin-12，hIL-12）和流行性出血热（epidemic hemorrhagicfever，EFH，又名肾综合症出血热，hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）病毒核蛋白抗体为模型，探讨了用两个AAV载体分别表达亚基的方法表达完整蛋白质的可行性。 将hIL-12的p35亚基和p40亚基分别克隆到AAV载体质粒-pSNAV中，构建成pSNAV-IL12-p35和pSNAV-IL12-p40质粒，并用脂质体分别将质粒转染BHK-21细胞，G418选择培养后形成新霉素抗性的rAAV载体细胞株，经扩增、染毒、纯化后，分别获得rAAV-IL12-p35和rAAV－InlZ中40，在体外将两种rAAV共同感染BHK毛 细胞，48 ，J’时后收集细胞培养上清进行兔疫学和生物学活性检测，经ELISA检测，产生的 hILl p70的含量为 10．185pg／ml；采用促进 IFN－m分泌实验，证明了通过共表达的方式可以在体外产生具有活性的 址L12。实验获得的r删－InlZ十35和 r洲－InlZ巾40有可能通过局部注射的方式对恶性肿瘤起治疗作用。 采用类似的方法，将EFH病毒核蛋白抗体的轻链、重链分别克隆到的 AAV载体中，构建了 pSN”－ANTM和 pSN卅－ANTIn质粒，进行G4选择培养、扩增、染毒、纯化后，将两种重组的 rAAV体外共同感染 BHK．ZI细胞，48小时后收集细胞培养上清进行免疫荧光检测，证实可以在体外产生完整的EFH病毒核蛋白抗体。 本研究采用的双亚基分别表达的方法模拟了双亚基组成蛋白质的自然表达方式。由于将双亚基分别构建在不同的表达载体上，这就避免了亚基之间在表达上的相互干扰；亦可通过调整两种rAAV的比例，使两个亚基在细胞内的表达比例更符合于自然状态。因此，与一个载体表达两个亚基的方式相比具有一定的优越性。 本研究采用两个 AAV载体分别表达亚单位的方法，表达 hIL－12和EFH病毒核蛋白抗体获得成功，进一步证实了双亚基分别表达形成具有完整功能活性蛋白质的可行性。本研究首次建立的 hIL－12的表达方怯具有潜在的临床应用价值；利用轻、重链分别表达的方式表达抗体为国内外首次报道，为抗体的基因治疗应用于临床提供了实验基础。