【摘 要】
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本研究应用RNAi技术沉默HER-2/neu基因观察其抗肿瘤作用,探讨在前列腺癌细胞中的表达及意义。针对HER-2/neu mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,通过测序、双酶切、PCR方法
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本研究应用RNAi技术沉默HER-2/neu基因观察其抗肿瘤作用,探讨在前列腺癌细胞中的表达及意义。针对HER-2/neu mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,通过测序、双酶切、PCR方法证明成功的构建了pSUPER-Her2 siRNA重组质粒,并转染人前列腺癌细胞PC-3M细胞;采用RT-PCR法检测转染pSUPER-Her2 siRNA重组质粒的细胞中HER-2/neu基因的mRNA的表达,流式细胞术(FCM)PI标记法检测细胞凋亡,Western blot半定量法检测细胞中HER-2蛋白的表达,免疫组化法检测前列腺癌细胞中HER-2/neu基因的蛋白表达。实验结果显示:①采用RT-PCR法检测到转染pSUPER-HER-2 siRNA重组质粒的前列腺癌细胞中HER-2/neu的mRNA低表达,转染pSUPER质粒及未转染质粒的前列腺癌细胞中HER-2/neu的mRNA高表达(P<0.05);②流式细胞术(FCM)PI标记法结果证明重组质粒可显著抑制前列腺癌细胞的体外生长,并诱导其凋亡;③Western blot结果亦证实重组质粒显著抑制前列腺癌细胞中的HER-2/neu基因蛋白表达水平;④免疫组化法检测前列腺癌细胞中HER-2/neu基因的蛋白高表达。实验证明RNAi技术沉默HER-2/neu显示出了明显的抗前列腺癌作用。本研究首次应用RNAi技术沉默HER-2/neu基因在前列腺癌细胞PC-3M中的表达。
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