骨肉瘤好发于青少年，是最常见的骨恶性肿瘤，约占骨原发恶性肿瘤的20％。在过去的20余年里，骨肉瘤的治疗取得了很大的进展，新辅助化疗已成为骨肉瘤治疗的标准模式。顺铂是运用于骨肉瘤化疗的最早和最具活性的化疗药物之一，但由于其较多而严重的毒副作用限制其临床疗效及应用。卡铂具有顺顷铂相似抗肿瘤谱，毒副作用较顺铂明显减小，但仍由于其严重的骨髓抑制亦影响了其临床疗效和应用。临床上已有顺铂联合卡铂治疗一些恶性肿瘤的报道，研究结果显示卡铂和顺铂虽为同一类药物，但其毒副作用各不相同，合用既不影响疗效而又能减轻毒副作用。本实验旨在通过半量顺铂和卡联合与单一顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株（OS-732）的细胞毒性的对比研究，来为顺铂联合卡铂治疗骨肉瘤提供实验依据。 材料和方法 一、材料 人成骨肉瘤细胞株（OS-732）购于北京积水潭医院创伤骨科研究所；顺铂（FH科鼎有限公司）；卡铂（百时美施贵宝公司）；MTT（Amresco）;RPMI 1640培养基（Gibcol）;DMSO；新生小牛血清（杭州四季青生物制品厂）；96孔培养板；细胞培养箱（Heraeus,HERA cell）；倒置显微镜（Leica,MPS 30）；全自动酶标仪（Opsys MR DYNEX 570nm） 二、方法 细胞常规培养于含体积分数10％新生小牛血清的RPMI-1640培养基中，其中含100unit／ml青霉素和100μg／ml链霉素，在37℃、体积分数为5％CO₂、95％空气、饱和湿度下，CO₂孵箱内闭式传代培养，用传代后第3日处于指数增殖期细胞备实验用。 2002浙江人学硕士学位论文 将细胞经胰酶消化制成息液后分别按种剑96孔板上，每孔加180卜I的细胞．旨液（细 胞浓度为IX10’／m1）和20ill的钓物。根据与不同fjj物作川分为两组：A组细胞株分 别与浓度为0、1．0、10．0、50．0、100．opg／ml的顺铂作川在CO。孵箱内培养48h。 B组细胞株分别与浓度为 0、40 0、80．0、160．0、320 ollg．’。l 的卜o作用在 COZ 孵箱内培养 48h。经上述处理后，加 MTT20pl／孔，继续培养 4h，弃上消液，加一甲 亚矾 150 pl／孔，振5＄j溶解后，测定每一孔的吸光度A（旧称光密度OD），并计算 其的细胞毒性指数值（Cytotoxicity Index简称 CI）。CI＝（对照组 A值－试验 组 A值）／对照组 A值 XI 00％。根据实验结果制作顺铂和卡铂对骨肉瘤细胞株 （OS－732）的生长曲线，并求出两者的 IC；。。根据实验所得的顺铂和卡铂的 IC；。， 再设两组，A组细胞株分别与IC；。的顺铂、IC；。的卡铂、l／ZIC；。的顺铂＋l／ZIC；。的P 铂作用在COZ孵箱内培养48h：B组细胞株分别与IC50的顺铂、ICS。的卡铂、l／ZICS。 的顺铂＋1／2IC50的卡铂作用在COZ孵箱内培养72h。同样进行MTT法试验，测量吸光 度A和计算J值。应wSPSSg 0统训软件，川卜。St HOCTestS方沾对实验结果进 行统计学处理。 结果 一、浓度为 0、10、10．0、50 0、100．opg．／ml的顺铂与骨肉瘤细胞株（OS－732）作 川48h吸光度＊值分别为】15士O 026、12O士Or51、0 42士0．010、0 I6士 0．0I5、0．10土0．009，CI值分别为4．0％、66．4？b、87．2？g、92．0％，制作工K曲 线求得顺铂对骨肉瘤细胞株（OS－732）的IC50为8刀pg。卜 浓度为0、40．0、 SO．0、1600、320 0［lgll 的卜D4骨肉瘤细胞株（OS－732）作川48h吸光 度A值分别为1．25士0．026、l．15士0．010、0．88i0．017、0．68f0．045、0．44 fo．168，CI值分别为8．0％、29．6％、45．6％、64．S％，制作土K曲线求得卜O对 骨’肉瘤细胞株（OS－732）的K。。为200刀pg；／ml。 二、IC；。的顺铂、IC。。的卜白、1／2IC。。的顺铂＋l／2！C；。的卜 与骨肉瘤细胞株 （OS－732）的作用 48h吸光度 A值分别为 l．29 fo、183、0．57士0．051、0．55 2 2002浙江人学硕士学位论文 土0．042、0．54 10．036，CI值分别为55．8％、57．4％、58．l％，三组比较无统 计学意义（P＞0．05）；IC50的JI匝铂、IC50的k铂、l／2IC50的1顺扣＋1／2IC50的卡铂 与骨肉瘤细胞株（OS－732）作川 72h吸光度A值分别为 l．49士0．091、0．53士 0．106、0．45土0．034、0．47士0．040，CI值分别为64．4％、69．8％、68．5％，IC；。 的顺铂组与1／ZIC。。的顺怕＋1／2！C；。的卡铂组和！C；。的H酣R比较均有纷计