目的:膀胱癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,在男性群体中的发病率要高于女性,约为女性的四倍。膀胱主癌要分为非肌层浸润型和肌层浸润型。膀胱癌复发率高,并且如果进展为肌层浸润型后预后较差。肌层浸润型膀胱癌预后较差主要是因为其具有进展性和对于放化疗等治疗耐药性的特点。对于此种类型的膀胱癌的治疗主要依赖于患者的临床信息和肿瘤的病理学结果。但是,在某些病例中,即使患者呈现出相同的组织病理学结果,他们对于同一种治疗的反应却是不同的,因此患者的预后情况也是不一样的。编码蛋白的基因只占人类全基因组的2%左右,而剩余基因的转录产物则为大量的非编码RNA。主要存在两种非编码RNA,包括小RNA和长链非编码RNA。长链非编码RNA与小RNA的主要区别就在于长度,长链非编码RNA的长度通常要大于200个核苷酸。与其他的非编码RNA相类似,长链非编码RNA与很多类型的恶性肿瘤存在着密切的联系,包括膀胱癌。大量研究证实,长链非编码RNA的表达水平与很多重要的细胞功能存在联系,可能提高了肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。随着长链非编码RNA在膀胱癌中发挥作用的研究数量的增多,越来越多的人开始关注长链非编码RNA。如果将传统的治疗手段和长链非编码RNA联合起来,可能会给我们提供更多的治疗选择。通过深入的研究,可以为我们进一步呈现膀胱癌患者基因层面的表达谱,进而利用非编码RNA作为精准靶向治疗的工具。LINC0460是人类第13号染色体的转录产物,长度为935bp,目前对于它的作用仍然了解的很少。最近的一些研究结果显示LINC00460与多种肿瘤存在着联系,包括肾癌、鼻咽癌和头颈癌。一篇通过生物信息学方法的研究发现,LINC00460可能通过调节细胞周期和细胞死亡来影响肿瘤细胞的发生和转移。在本研究中,我们通过分析膀胱癌组织中差异表达的长链非编码RNA发现,LINC00460在膀胱癌组织表达上调。另外,LINC00460高表达组的患者与对照组相比,预后较差。因此,我们推测LINC00460可能在膀胱癌的生物发展过程中起到一定的作用。但是,具体的过程和机制仍然需要进一步实验的证实本实验的主要目的是:1、探索LINC00460在膀胱癌组织和细胞中的基础表达情况及其与患者的预后相关性。2、LINC00460对膀胱癌细胞的增殖和迁移能力的影响。3、LINC00460对膀胱细胞增殖和迁移能力影响的具体机制。研究方法:1、在TCGA数据库(The Caner Genome Atlas)中下载膀胱尿路上皮癌的RNA测序的原始数据和相关的临床数据(包含412例患者,413个样本),对所有样本的RNA表达水平进行标准化。用R软件中的edgeR语言包分析P值和差异表达的倍数。用RT-qPCR方法研究LINC00460在膀胱癌细胞系(5637,T24,J82,TCCSUP,UM-UC-3)和正常膀胱上皮细胞系中(SV-HUC-1)的基础表达情况。2、我们将构建的靶向沉默LINC00460的shRNA转染到T24和5637细胞内,将过表达LINC00460的pcDNA-LINC00460转染到T24和5637细胞内。转染48h后通过观察绿色荧光蛋白表达情况和RT-qPCR证明LINC00460的转染效率。通过CCK-8和划痕实验研究沉默与过表达LINC00460后对膀胱癌细胞的增殖与迁移能力的影响。利用CCK-8检测细胞活力而选择最大的MA2刺激浓度以及与MA2共培养后细胞增殖能力的变化。应用starBase v2.0预测与FTO mRNA及LINC00460结合的microRNAs。用双荧光素酶报告基因检测LINC00460与预测的miR-320a靶向结合位点及结合作用。3、用SPSS 23.0(IBM,美国)版本做数据分析。用t检验分析肿瘤与正常组织对照间的LINC00460和FTO mRNA表达差异。膀胱癌细胞系T24和5637与正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1间LINC00460的表达差异用Tamhane’s post-hoc检验做单因素分析。将LINC00460和FTO mRNA的表达值原始数据进行log10转换,然后用斯皮尔曼相关性分析方法做二者之间的相关性分析。用R软件(3.4.0版本)中的生存分析语言包做Kaplan-Meier曲线。P<0.05认为存在统计学意义。结果:1、膀胱癌组织中的LINC00460表达水平明显高于正常组织(P<0.0001),膀胱癌细胞系(T24,5637)中LINC00460的表达水平也明显高于正常对照组(SV-HUC-1)(P<0.05)。2、在全部群体当中,LINC00460高表达组的预后差(P=0.04678)。通过对不同的性别进行分组,而后进行预后分析发现,男性群体患者中LINC00460高表达组的预后差(P=0.03229),但是在女性群体中却没有这样的预后差异(P=0.42445)。3、下调T24和5637中LINC00460的表达后,T24和5637细胞的增殖能力和迁移能力都明显下降,而上调T24和5637中LINC00460的表达后,T24和5637细胞的增殖能力和迁移能力都明显增强。4、膀胱癌的患者的癌组织以及正常膀胱粘膜上皮对照组织中FTO mRNA的表达水平与LINC00460的表达呈正相关(P<0.0001;r=0.73),FTO mRNA高表达组患者的预后相比低表达组患者更差(P=0.003)。5、下调LINC00460后可同时抑制FTO在mRNA和蛋白水平的表达,但是下调FTO后LINC00460的表达水平不受影响。6、过表达LINC00460后膀胱癌细胞增殖能力和迁移能力的增强可被FTO抑制剂(MA2)抵消。7、LINC00460通过竞争性吸附miR-320a而下调FTO的表达。结论:膀胱癌组织和膀胱癌细胞系中的LINC00460表达水平均明显高于其各自的正常对照组,并且在全部群体当中LINC00460高表达组的预后较差。因此,我们认为LINC00460可以作为膀胱肿瘤预后潜在的标志物。下调T24和5637中LINC00460的表达后,细胞的增殖能力和迁移能力都明显下降。过表达T24和5637中LINC00460的表达后,细胞的增殖能力和迁移能力都明显提升。我们双向证明了LINC00460对于膀胱癌细胞的增殖和迁移能力的影响。我们进一步的研究发现,膀胱癌患者中,FTO mRNA高表达组的预后相比低表达组更差。近些年的研究发现,脱甲基酶FTO可以通过调控血液肿瘤和脑胶质瘤细胞中m~6A水平而发挥着致癌的作用。我们进一步的研究发现LINC00460可以通过与FTO mRNA竞争性结合miR-320a而影响FTO的表达水平,进而影响膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力,是膀胱癌分子靶向治疗的潜在靶点。