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变形杆菌(Proteus)属肠杆菌科(Enterobacteriaceae),为革兰氏阴性菌,需氧或兼性厌氧,在土壤、水体及污染物中广泛存在。变形杆菌具运动性,其生长呈现迁徙生长现象。变形杆菌是人类常见的条件致病菌,常会引起尿路感染及创伤感染。
脂多糖是革兰氏阴性菌外膜的最外层部分。脂多糖中的O-抗原成分是脂多糖中最多变的成分,常作为革兰氏阴性细菌的特异分子识别标志。目前,大多数变形杆菌的O-抗原糖结构已经得到破译。变形杆菌O-抗原基因簇的破译及分析对于研究变形杆菌O-抗原的合成机制具有重要作用。
本研究中利用鸟枪法构建变形杆菌O-抗原基因簇文库,经测序、序列拼接获得O-抗原基因簇的全序列,并用生物信息学的方法对O-抗原基因簇进行分析。同时筛选了5株变形杆菌的O-抗原特异基因,建立了一种多重PCR体系,用于快速鉴定本研究中的5株变形杆菌。
经生物信息学分析发现,本研究中的5株变形杆菌的O-抗原基因簇中均含有糖基转移酶基因、寡糖单位处理酶基因及糖合成酶基因。同时甲基转移酶基因、甘油3-磷酸脱氢酶基因、丝氨酸乙酰转移酶基因也在5株变形杆菌中普遍存在。wzy基因是5株变形杆菌的特异基因。建立了一种多重PCR的检测体系,在以25 ng变形杆菌基因组为模板时即可检测出变形杆菌的血清型。