【摘 要】
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目的:本项目旨在检测正常宫颈组织细胞及不同宫颈病变组织细胞中PAX1、p16及miR-124-2基因区段连续甲基化情况,研究其与临床病理程度的关系,探究其在宫颈病变的发生及发展过程中的意义,初步评估其在宫颈病变筛查与早期诊断的临床意义。方法:1.于2018年12月至2019年11月深圳市人民医院就诊且HPV检测阳性的患者中,收集活检病理检查符合条件的患者液基细胞学标本各25例,包括:(1)未见上皮
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目的:本项目旨在检测正常宫颈组织细胞及不同宫颈病变组织细胞中PAX1、p16及miR-124-2基因区段连续甲基化情况,研究其与临床病理程度的关系,探究其在宫颈病变的发生及发展过程中的意义,初步评估其在宫颈病变筛查与早期诊断的临床意义。方法:1.于2018年12月至2019年11月深圳市人民医院就诊且HPV检测阳性的患者中,收集活检病理检查符合条件的患者液基细胞学标本各25例,包括:(1)未见上皮内病变或恶性细胞症(NILM);(2)低度鳞状上皮内病变(LSIL);(3)高度鳞状上皮内病变(HSIL);(4)宫颈鳞状细胞癌(SCC)。2.利用基于重亚硫酸盐转化的新一代甲基化测序技术,检测PAX1、p16及miR-124-2基因区段连续甲基化情况。3.机器学习并评估PAX1、p16及miR-124-2基因甲基化与宫颈病变的关系。结果:1.样本平均年龄为41.22±11.59岁,组间差异有统计学意义,其中宫颈癌组平均年龄较其他三组明显增高。2.HPV16/18型感染率随着病变进展而升高,除去6例未分型的样本,合并16和(或)18型HPV感染者在HSIL及SCC中比例为76.6%,而LSIL及NILM组仅为25.5%。3.PAX1基因中检测到39个有意义的甲基化位点,组成(1,3)(第1至第3位甲基化位点,下同),(4,32)及(34,36)连续甲基化位点组合,三者的ROC曲线表现类似。以(1,3)为例,其平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.79(95%CI,70-87%),取最佳截断值为0.04,此时约登指数为0.52,对应的敏感度和特异度分别为70%和82%;诊断SCC时AUC 0.91(95%CI,84-96%),取最佳截断值为0.11,此时约登指数为0.75,对应的敏感度和特异度分别为84%和90.67%。4.p16基因中检测到11个有意义的甲基化位点,组成(0,1)和(3,9)连续甲基化位点组合:(0,1)的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.88(95%CI,80-94%),取最佳截断值为0.15,此时约登指数为0.68,对应的敏感度和特异度分别为68%和100%;诊断SCC时AUC 0.98(95%CI,93-100%),取最佳截断值为0.20,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%;(3,9)的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.89(95%CI,81-94%),取最佳截断值为0.09,此时约登指数为0.68,对应的敏感度和特异度分别为72%和96%;诊断SCC时AUC 0.97(95%CI,92-100%),取最佳截断值为0.20,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%。5.miR-124-2基因中检测到10个有意义的甲基化位点,组成(2,3)和(5,9)连续甲基化位点组合:(2,3)的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.84(95%CI,75-91%),取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.58,对应的敏感度和特异度分别为72%和86%;诊断SCC时AUC 0.96(95%CI,90-99%),取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.80,对应的敏感度和特异度分别为100%和80%%;(5,9)的平均甲基化水平诊断HSIL+时AUC 0.85(95%CI,76-91%),取最佳截断值为0.08,此时约登指数为0.62,对应的敏感度和特异度分别为72%和90%;诊断SCC时AUC 0.97(95%CI,91-99%),取最佳截断值为0.13,此时约登指数为0.84,对应的敏感度和特异度均为92%。结论:本研究证明了PAX1、p16及miR-124-2连续甲基化程度可以作为宫颈病变的筛查及早期诊断的参考指标,并对传统的HPV检测及细胞学检查进行补充。
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