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野油菜黄单胞菌经过发酵产生的一种胞外多糖称为黄原胶,黄原胶的合成是一个复杂而精细的过程,需要多种酶和其他因子的参与,如转移酶I-V、缩酮丙酮酸转移酶、乙酰化酶、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶和多聚酶等。有关野油菜黄单胞菌的分子遗传学研究也日渐受到重视,通过对其生物合成途径的阐明及Xcc遗传研究系统的建立,利用基因工程定向改造并构建重组菌株的研究工作取得了一定的进展。本课题选取野油菜黄单胞菌的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因作为研究对象,探讨其对野油菜黄单胞菌遗传特性的影响。以野油菜黄单胞菌作为原始菌株,提取基因组DNA;扩增尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因;将尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因与p MD~?19-T载体连接,转入大肠杆菌感受态细胞中;经鉴定将尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因与pK18mobSacB质粒相连,转入大肠杆菌感受态细胞中,鉴定后再转入到野油菜黄单胞菌感受态细胞中;经过基因重组获得野油菜黄单胞菌的突变体。通过突变体与原始菌株生长曲线比较;突变体与原始菌株的平板培养分析、黄原胶产量比较和黄原胶粘度比较;突变体与原始菌株产的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的比较;说明突变体的遗传特性可能受尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因突变的影响。为进一步验证尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的突变是影响野油菜黄单胞菌遗传特性的因素,进行了目的基因的过量表达。将目的基因与pHM1质粒相连,先转入大肠杆菌感受态细胞中,经鉴定后再转入到野油菜黄单胞菌突变体感受态细胞中,获得突变体的过量表达菌株;通过突变体、原始菌株和突变体的过量表达菌株的生长曲线比较;平板培养分析、黄原胶产量比较和黄原胶粘度比较;产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的比较;进一步证明野油菜黄单胞菌的遗传特性受尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的调控。