论文部分内容阅读
目的:宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率仅次于乳腺癌。宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)发展至宫颈癌是一个复杂而漫长的过程,近年来宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发病率有上升趋势,尤其是年轻宫颈癌的发病率明显升高。国际癌症研究中心(IARC)专题讨论会(1995年)明确提出人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要危险因素,分子机制研究表明,E6蛋白是HPV参与细胞恶性转化的主要蛋白,E6通过与细胞周期调节因子p53结合发挥其致癌作用,但从发病机制上看,宫颈癌的发生还需要其他多方面因素的参与,如细胞周期紊乱,细胞凋亡机制的抑制等,其中调节细胞周期的细胞周期蛋白E(CyclinE)与抑制细胞凋亡有关的Survivin是目前研究的热点。本研究应用免疫组织化学和流式细胞技术的方法检测CyclinE、Survivin和HPV16-E6蛋白在正常宫颈组织、慢性宫颈炎症组织、CIN组织、宫颈癌组织中的表达情况,研究它们与宫颈癌年龄、临床分期、组织分化程度等临床病理特征之间的关系,探讨三者在宫颈癌发病中的协同作用,为宫颈癌的发生发展机制提供新的思路,为宫颈癌早期诊断提供理论依据,也为宫颈癌的早期防治提供新靶点。方法1应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)S-P法检测10例正常宫颈标本、30例慢性宫颈炎标本、24例CIN和48例宫颈癌标本中CyclinE、Survivin和HPV16-E6蛋白的表达情况。2应用流式细胞分析技术(Flow Cytometrye, FCM)的方法定量检测10例正常宫颈标本、12例慢性宫颈炎标本、15例CIN和25例宫颈癌标本中CyclinE、Survivin、HPV16-E6的蛋白含量。3运用统计软件SPSS 13.0进行统计分析。结果1在正常宫颈标本、慢性宫颈炎标本、CIN和宫颈癌标本中CyclinE的阳性表达率整体上呈上升趋势,四组比较有显著性差异(x2=39.65, P<0.01)。正常组与慢性宫颈炎组比较,差异无显著性(P>0.05);正常组与慢性宫颈炎组合并后分别与宫颈癌组及CIN组比较,差异均有显著性(P<0.01, P<0.05);宫颈癌组与CIN组比较,差异亦有显著性(P<0.05)。在宫颈癌中,CyclinE的表达与病理类型、组织学分级、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、宫旁浸润及浸润深度无关(P>0.05)。应用FCM法检测CyclinE在四组组织中细胞内的蛋白含量,正常宫颈组、宫颈炎组、CIN组和宫颈癌组中表达量的FI值( x±s)分别为0.98±0.06,1.00±0.04,1.40±0.12和1.68±0.15,依次上升,四组比较有显著性差异(F=131.95, P<0.01)。组间比较显示:CyclinE表达量在正常宫颈组和宫颈炎组间比较无显著性差异(P>0.05),其余各组进行两两比较均有显著性差异(P<0.01)。2 Survivin在正常宫颈标本、慢性宫颈炎标本、CIN和宫颈癌标本中的阳性表达率整体上呈上升趋势,四组相比有显著性差异(P<0.01)。正常组与慢性宫颈炎组比较,差异无显著性(P>0.05);合并正常组与慢性宫颈炎组后,宫颈癌组及CIN组分别与之比较,差异均有显著性(P<0.01, P<0.05);宫颈癌组与CIN组比较,差异无显著性(P>0.05)。在宫颈癌组织中,Survivin的表达与年龄、病理类型、肿瘤大小、宫旁或脉管浸润及浸润深度无关(P>0.05),与临床分期和组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。应用FCM法检测Survivin在细胞内的总含量,Survivin在正常宫颈组、宫颈炎组、CIN组和宫颈癌组中的蛋白表达量分别为0.99±0.09,1.03±0.02,1.33±0.03和1.93±0.24,四组比较差异有显著性(F=121.24, P<0.01)。组间比较显示Survivin表达量在正常宫颈组和慢性宫颈炎组比较无统计学意义(P>0.05),其余各组进行两两比较均有统计学意义,(P<0.01)。3 HPV16-E6在正常宫颈标本、慢性宫颈炎标本、CIN和宫颈癌标本中的阳性表达率整体上呈上升趋势,四组比较有显著性差异(P<0.01)。正常组与慢性宫颈炎组比较,差异无显著性(P>0.05);合并正常组与慢性宫颈炎组后,宫颈癌组及CIN组分别与之比较,差异均有显著性(P<0.01, P<0.05);宫颈癌组与CIN组比较,差异无显著性(P>0.05)。在宫颈癌组中,HPV16-E6蛋白的表达与年龄及组织学类型有关(P<0.05),与分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、肿瘤大小及浸润深度无关(P>0.05)。应用FCM法检测HPV16-E6在细胞内的含量,在正常宫颈组、宫颈炎组、CIN组和宫颈癌组中的蛋白表达量分别为:0.96±0.08,1.02±0.02,1.35±0.14和1.43±0.16,四组比较有显著性差异(F=47.31, P<0.01)。组间比较显示正常组与炎症组比较无显著性差异(P>0.05),CIN组与宫颈癌组比较无显著性差异(P>0.05),其它组间比较均有显著性差异(P<0.01)。4应用Spearman等级相关分析发现,在宫颈癌组织中,CyclinE与Survivin表达呈正相关(r=0.459, P<0.01);CyclinE与HPV16-E6蛋白的表达呈正相关(r=0.522, P<0.01);Survivin与HPV16-E6蛋白的表达亦呈正相关(r=0.404, P<0.01)。结论1 CyclinE、Survivin及HPV16-E6蛋白在正常宫颈标本、慢性宫颈炎标本、CIN和宫颈癌标本中的表达呈依次升高趋势。它们的异常表达可能与宫颈癌的发生发展有关。联合检测三者可能有助于宫颈癌的早期诊断。2 CyclinE表达与宫颈癌的临床分期、病理类型、组织分化程度、淋巴结转移有关,Survivin表达与宫颈癌的临床分期、组织分化程度和淋巴结转移有关,提示它们可能是预测宫颈癌侵袭性及预后的有效监测指标。3 HPV16-E6蛋白高表达多见于45岁以下宫颈癌患者,且与宫颈鳞癌的发生有关,提示检测HPV16感染有助于45岁以下女性宫颈鳞癌的筛查。4实验表明CyclinE、Survivin、HPV16-E6在宫颈癌中的表达两两均呈正相关,提示三者可能在宫颈癌的发生发展中有协同作用。