【摘 要】
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采用该实验室分离得到的产壳聚糖酶的假单胞菌,发酵培养后,将发酵液冷冻离心,取上清液通过30%冰冷丙酮沉淀以及Sephadex G-25层析柱和Sephadex G-100柱层析等方法对酶进行了
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采用该实验室分离得到的产壳聚糖酶的假单胞菌,发酵培养后,将发酵液冷冻离心,取上清液通过30%冰冷丙酮沉淀以及Sephadex G-25层析柱和Sephadex G-100柱层析等方法对酶进行了分离纯化,得到两个具有壳聚糖酶活性的色谱峰,分别合并具有较高酶活性的柱洗脱液后,经PEG20 000浓缩,得到两种纯化的壳聚糖酶,即壳聚糖酶Ⅰ和Ⅱ.壳聚糖酶Ⅰ的纯化倍数为6.84倍.纯化后的酶分别经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),均显示一条电泳带,分子量分别为31KD(成分Ⅰ)和20.1KD(成分Ⅱ).由于酶Ⅱ的总酶活力很低只占酶Ⅰ的不足10%,所以在以后的特性研究中仅研究酶Ⅰ的特性.对纯化后壳聚糖酶Ⅰ的特性研究表明,该酶在4℃下,贮存7天以内,表现出极高的稳定性,酶活力保持在97%以上.以胶体壳聚糖为作用底物,它的最适pH为4.5,在pH5.0-6.5范围内有较高稳定性,最稳定的pH为5.0.最适作用温度为55℃,热稳定性范围为30℃-40℃,最稳定的温度为30℃.该酶对壳聚糖的降解具有专一性,没有几丁质酶活性.测定Km值得到,该酶对胶体壳聚糖的Km值为2.02mg/mL.金属离子对该酶活性影响的研究表明,Sn<2+>,Ag<+>,Zn<2+>,Mn<2+>对酶有强烈的抑制作用,Al<3+>,pb<2+>对酶也有明显的抑制作用.
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