裸花紫珠抗单纯疱疹病毒Ⅰ型药效物质基础研究

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裸花紫珠Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.为马鞭草科紫珠属植物,曾收载于《中国药典》1977版一部,功效消炎,解毒,收敛,止血,临床用于细菌感染引起的炎症,急性传染性肝炎,呼吸道和消化道出血。目的:对裸花紫珠的抗单纯疱疹病毒1型的活性物质进行追踪,分离纯化并鉴定其抗HSV活性成分,对分离所得的成分进行抗HSV活性确认,同时进行抗炎、调节免疫的相关活性研究,阐释其抗HSV机理。方法:系统分离法分别制备裸花紫珠石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇部位以及相应的敲除部位,采用HSV-1感染的Hep-2细胞模型,进行体外抗HSV-1活性的评价,将制备的各部位抗HSV活性与全成分组进行比较,确定裸花紫珠体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的活性部位;采用色谱技术(硅胶柱色谱、中压快速分离色谱、凝胶色谱、制备HPLC)、重结晶等手段结合体外体外抗HSV-1活性的评价对裸花紫珠乙酸乙酯部位进行化学成分研究,采用薄层色谱、核磁和质谱等技术对所分离的化合物进行结构鉴定;采用HSV-1感染的Hep-2细胞体外模型对分离得到的单体进行抗HSV活性筛选,应用Reed-Muench法计算活性成分的治疗指数(therapeutic index,TI);应用小鼠脾脏血细胞原代培养法,研究所得成分对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响;分离培养小鼠巨噬细胞研究所得成分对体外培养小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果:确定了乙酸乙酯部位为其主要抗HSV活性部位,从中分离得到11个化合物,分别鉴定为(1)熊果酸,(2)齐墩果酸,(3)β-谷甾醇,(4)6,7-二羟基香豆素,(5)阿魏酸,(6)木犀草素,(7)异鼠李素,(8)山奈酚,(9)Acteoside,(10)松果菊苷,(11)木犀草素-7-O-葡萄糖苷。其中化合物8和10为在裸花紫珠中首次发现。木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷为抗HSV活性成分,其TI分别为23.32和10.53,6,7-二羟基香豆素、阿魏酸、木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷在一定的浓度下可以促进脾脏细胞的增殖,并呈现剂量依赖性;6,7-二羟基香豆素,阿魏酸,木犀草素在体外可以促进巨噬细胞的细胞增殖,可以抑制LPS诱导的NO产生,具有一定的抗炎活性。结论:裸花紫珠在抗HSV方面具有多成分多靶点的特点,其既可以直接抑制病毒,也可以通过调节免疫增强机体的抗HSV活力,同时降低机体炎性因子的释放,控制病毒对机体的损害从而达到治疗病毒性疾病的效果;其中直接抗HSV的的活性成分为木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷,具有免疫调节活性的成分为6,7-二羟基香豆素、阿魏酸、木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷,具有抗炎活性的活性成分为6,7-二羟基香豆素,阿魏酸,木犀草素。
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