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目 的（1）通过导向治疗的方法，探索结肠癌行微栓塞化疗的可行性与安全性，以及微栓塞化疗后的形态学改变，药代动力学变化。为提高结肠癌动脉灌注化疗效果，开拓结肠癌微栓塞化疗提供理论依据。（2）通过环孢菌素A在体外、体内逆转结肠癌多药耐药基因（MDR1）的效果观察，为临床上提高结肠癌化疗效果，改进化疗药物配伍提供依据。 第一部分、肠系膜下动脉灌注化学微栓子的可行性与安全性的实验 材料和方法 将成年杂种犬20只分为：1.对照组（犬10只），其中又分为A.微粒组（5只）。B.碘化油乳剂组（5只）。2.实验组（犬10只），分为C.单纯微栓塞组和D.微栓塞化疗组。栓子为CH44，Φ10～20μm，化疗药物为FAM，犬各5只。经腹行肠系膜下动脉插管，推注不同栓子，观察犬术后反应。于不同时间取栓塞及非栓塞段结肠壁，肝、淋巴结等作光镜及透射电镜检查，并作尸体解剖。 结 果 对照组栓塞段结肠完全坏死，所有犬均于12～72小时内死亡，实验组仅结肠粘膜及粘膜下层出现一过性变性，偶有微小灶状坏死，肠壁见炎症细胞渗出，粘膜下层多见。微栓塞化疗组反应强于单纯微栓塞组。结肠无不可逆坏死及穿孔。损伤2周后完全修复，肝、肺、肾、淋巴结等组织中有微栓子存在。 结 论 犬正常结肠可耐受φ10～20μm CH44微粒的微栓塞化疗。不会造成正常结肠不可逆坏死及穿孔。 第二部分、肠系膜下动脉灌注化学医用活性炭微粒的实验观察 材料和方法 成年健康杂种犬6只，麻醉后行肠系膜下动脉插管及经腹门静脉插管。在DSA下观察单纯造影剂及混有Φ10～20μm 肠系膜下动脉微栓纂化疗及结肠掠多药耐药基出转导的实验研究 摘要 CHM微粒的造影剂显影情况。用高效液相色谱法测定门静脉血中 5－ Fll浓度，作散点图。计算单纯动脉灌注化疗和微栓塞化疗后5工ll 的半衰期，进行 t检验，（由 Microsoft Excel 97）e算。5Fu用量 为 20mg／kg，CH。悬液用量0．3m呐，造影剂用量为 0．srul／kg，高压 注射泵推注5Fu速度为0．Zml／秒，推注造影剂速度为Zml／秒。微栓 塞化疗后3小时取栓塞段结肠作光镜及电镜检查，两周后处死动 物，作尸体解剖。 结 果推注单纯造影剂后血管显影时间6．25士1．50秒，显影血 管走向舒展自然、平滑。推注加有CH44微粒的同等剂量造影剂后血 管立即痉挛迂曲，成蛇行状，血管分支细少。血管显影时间15．5土 3．2分钟，与单纯造影剂血管显影时间差异显著／门静脉中5Fu在 单纯动脉灌注时初始浓度高，衰减速度快，平均半衰期t厂12．36士 5．25分钟，在微栓塞化疗时初始浓度相对较低，其后上升，再缓慢 下降。衰减速度慢，平均半衰期t；。＝47．33土14．02，与单纯灌注化疗／ 时有显著差异o功刀1)。微栓塞化疗段结肠在3小时形态学改 变：粘膜肿胀、细胞变性，偶见出血及坏死灶，粘膜及粘膜下层有 炎症细胞渗出。两周后见粘膜形态正常，偶见部分粘膜出现增生及 灶壮纤维瘤痕增生。 结 论肠系膜下动脉灌注。10～20 P m化学医用活性炭微粒 后，可提高灌注结肠及门静脉中化疗药物的浓度，延长药物作用时 间，并可产生缺血再灌注效应，从而可直接和间接地提高结肠癌化 疗效果。 第三部分、EGFP基因在结肠癌L。V。细胞中的导入和表达 材料和方法构建含增强型绿色荧光蛋白单基因的逆转录病毒载 体G；FP，用脂质体转染结合交互感染的方法获得高浓度的双嗜型 EGFP病毒，并转导入结肠癌L。Vo细胞，EGFP基因的转移和表达 分别以聚合酶链反应0CR)和流式细胞仪吓CM)分析。 结 果将GJP载体转染的GP＋E—86和GP仲 细胞共 培养2周后，取单嗜型EGFP病毒感染双嗜型包装细胞获得病毒生 5 肠系眼下动脉微栓形化疗及织肠依多药耐药某卜l转导的实验研究 摘要 产细胞AinlZ们；FP，所有细胞均表达高水平的EGFP，其滴度为 l、IX10’感染性颗粒／ml．双嗜型EGFP转导的LoVo细胞可稳定而长久 地发出明亮绿色荧光信号，PCR分析显示L。VO／GFP细胞内有EGFP 原病毒。 结 论可通过基因转导的方法建立稳定表达EGFP基因的结肠 癌L。Vo细胞系。从而为观察结肠癌生长、浸润、转移提供新型实 验模型 第四部分、环抱菌素A逆转结肠癌多药耐药基因的体外观察 材料和方法以人结肠癌细胞系L。VO为研究模型，用RT－PCR 和 FC