论文部分内容阅读
目的：本实验以转染Apollon反义寡核苷酸(Anti Oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胆管癌细胞QBC939细胞增殖、凋亡及对Apollon蛋白表达的影响,为后续的深入研究提供基础。方法：应用脂质体(Lipofectamin RNAimax)将Apollon ASODN瞬时转染入传代培养的人胆管癌QBC939细胞中。实验分为：Lip-ASODN组(终浓度200、400、600、800及1600nM)、Lip-MSODN(missense oligodeoxynucleotides)组、空脂质体组、细胞对照组。MTT检测不同浓度的不同时间的Apollon ASODN对细胞生长增殖的抑制作用；选出最佳的作用时间和浓度；Western Blot检测干扰效率即转染前后Apollon蛋白的表达变化。流式细胞仪检测Apollon ASODN转染前后对人胆管癌QBC939细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：在脂质体(Lipofectamin RNAimax)介导下可以成功的将Apollon ASODN转染入胆管癌QBC939细胞中,并可以检测到较高的抑制效率,且在一定浓度范围内呈现剂量的依赖性。MTT检测结果表明5种浓度梯度的反义寡核苷酸对QBC939细胞均出现了细胞的增殖抑制,在200～800nmol/L呈时间和剂量依赖性；ASODN组在不同浓度和时间对QBC939细胞的抑制率均明显高于MSODN组及脂质体组以及细胞对照组,在Apollon ASODN800nmol/L在转染后48h效果最好,最大抑制率为63.88±0.24,差异有统计学意义(P<0.05); Western Blot示：ApollonASODN转染QBC939细胞后均可大幅度地抑制Apollon蛋白表达,其最大下调幅度为81.6%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术PI单染法分析细胞周期表明：不同浓度的apollon ASODN作用于QBC939细胞48h后,随着浓度增加,细胞出现明显的S期阻滞的百分比也增加,最高达35.67%；流式细胞术PI/Annexin V双染法检测细胞早期凋亡率示：Apollon ASODN作用48h后,ASODN组的早期凋亡率明显高于control组(P<0.05),MSODN组与对照组相比对凋亡无明显影响(P>0.05),在200-800nmol/1之间Apollon ASODN呈浓度依赖性,随浓度的增高,其早期凋亡率也明显增高。结论：脂质体(Lipofectamin RNAimax)能将pollon ASODN有效的转染入人胆管癌QBC939细胞中,转染后Apollon ASODN能明显下调人胆管癌QBC939细胞Apollon蛋白的表达,有效抑制其增值,并促进其凋亡。本实验表明通过封闭Apollon基因的相关功能区域在一定程度上可抑制胆管癌细胞的增值并诱导细胞凋亡的发生。