本研究的目的是为我们建立的用于药物有效成分筛选的受体色谱模型提供高纯度的β2-肾上腺素能受体(β2-AR)。为此，我们采用基因工程技术，从猪肝脏组织中克隆出猪β2-AR基因全长序列，将其在大肠杆菌中进行融合表达，并对表达产物进行了初步的分离和纯化，为该受体的大规模制备奠定了基础。 (1)根据GenBank中猪β2-AR全长cDNA-序列设计一对特异性引物，分别以猪肝脏组织总RNA为模板进行RT—PCR反应和以基因组DNA为模板进行PCR反应，同时扩增目的基因。然后将其与pUC18载体进行体外连接，转化感受态大肠杆菌E．Coil DH5α并筛选阳性克隆。PCR、双酶切和测序鉴定结果表明，二者均扩增出长1257 bp的目的基因片段，可编码418个氨基酸。测序结果与GenBank中收录的猪β2-AR序列比对，前者同源性为99.52％，编码的氨基酸有99.04％相同；后者同源性为99.44％，编码的氨基酸有98.80％相同。再将本研究中两种扩增方法的测序结果进行比对，同源性为99.84％，编码的氨基酸有99.52％相同； (2)设计引物时，在上游引物中引入了EcoRⅠ酶切位点，在下游引物中引入了SalⅠ酶切位点，利用EcoRⅠ/SalⅠ将克隆的β2-AR全长片段从构建的克隆载体pUC18—β2-AR中切下，将其与被EcoRⅠ/SalⅠ双酶切后的pET32a载体体外连接并转化感受态大肠杆菌E．Coil BL21(DE3)，然后以IPTG诱导使其在大肠杆菌中表达。诱导前后全菌体蛋白经SDS—PAGE检测，诱导后较诱导前在66.5 kD处有一明显条带，表明该受体以融合蛋白形式在大肠杆菌中得以表达；对重组菌在不同IPTG浓度和不同培养时间下进行诱导，经SDS—PAGE和薄层扫描分析，结果显示IPTG浓度约为2.0 mmol/L、诱导时间约为4.0h时融合蛋白表达量最高，约为17.1％； (3)由于所设计的融合β2-AR受体具有6×His—tag，His标签可与固定化的金属离子Ni2+高度选择，并强力亲和，我们在Ni2+—Sepharose Fast—Flow亲和层析上对其进行了初步分离和纯化。用不同咪唑浓度的磷酸盐溶液进行梯度洗脱，对洗脱峰进行SDS—PAGE分析，结果显示峰2在66.5 kD处有一明显条带，为目标蛋白峰，其纯度约为50％。