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干细胞具有自我更新和分化为多种特定类型细胞的能力,主要包括胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)、胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cells,EGCs)和诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)。诱导多能干细胞是通过在体细胞中引入多能性四因子,并使用ES培养体系培养,获得具有ES细胞特性的多能干细胞系。相较于ESCs和EGCs,iPSCs具有与之相似的多潜能性,能够定向分化为多种组织细胞,同时因其供体细胞来源的广泛性、技术的普适性及能够避免社会伦理问题等,使其在重大疾病细胞治疗、药物筛选、疾病诊疗、再生医学领域、动物遗传资源保护及转基因动物模型的建立等方面拥有极其重要的学术价值和广阔的应用前景。猪作为常见的实验动物模型,因其在免疫学、组织器官形态学和生理结构上与人类具有较高的相似性,因而正逐渐成为人类异种移植、细胞治疗和再生医学研究的理想动物模型。良好的应用前景和广泛的需求对猪ES细胞和猪iPS细胞的建系提出迫切的期望。在试验中,我们首先对正常培养猪Dox-iPS,Feeder~—-Dox-iPS,Feeder~—-Dox~—-iPS进行mRNA-Sequence分析,发现多能性四因子在启动细胞重编程的同时,使内源性Lin28a的表达量显著上调。在此基础上,我们通过构建Lin28a启动子区域双荧光素酶报告载体,与多能性四因子载体进行双荧光素酶检测,发现Sox2能够特异性结合Lin28a的启动子区域,上调Lin28a的表达。为了进一步验证重编程过程中Lin28a的启动,我们分离猪的原代支持细胞进行四因子诱导重编程,共获得三株DOX-iPS细胞株,通过形态学观察、免疫荧光染色以及内源性多能基因检测,发现猪支持细胞重编程过程中Lin28a启动表达。为进一步确定Lin28a在猪DOX-iPS细胞中的功能,我们构建了TRIP-EF1-Lin28a、TRIP-EF1-GFP、PCDH-Lin28a-MCS-EF1-copGFP和shRNA-Lin28a干扰载体,并获得了超表达和干扰Lin28a的iPS细胞系,通过定量检测发现在DOX-iPS细胞中超表达Lin28a,多能基因Sox2等未发生显著变化,但细胞增殖加快且克隆形态变扁平,而干扰Lin28a后,细胞增殖减慢,但细胞内多能性基因Oct4等显著上调,说明在重编程过程中,Sox2和Oct4对Lin28a的调控作用相互拮抗,从而实现了Prime向Na?ve状态的转变。我们的研究表明Lin28a是猪iPS细胞多能性维持的关键节点,Lin28a的上调促进猪iPS细胞的增殖,在prime状态的iPS细胞中,干扰Lin28a后Oct4等多能性相关基因表达量上升,多能性提高。