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虫草属于真菌类,具有很好的药用价值和实际应用价值。本实验以粉被虫草(Cordyceps pruinosa Petch)为研究对象,分别对人工培养粉被虫草孢梗束和菌丝体(菌株RCEF4730)、人工粉被虫草孢梗束和野生孢梗束进行代谢组分析比较,通过比较发现他们的差异代谢物,并成功分离和鉴定了其中的两种差异标记物的分子结构。 本实验利用高效液相-高分辨质谱联用技术(LC-DAD-HRMS),通过代谢组学的方法分析粉被虫草孢梗束与菌丝体的代谢差异,以及孢梗束在人工培养条件下和野外生长条件下的代谢差异。利用PCA(主成分分析)和OPLS-DA(偏最小二乘法-判别分析)的方法处理数据,结果显示:人工孢梗束与菌丝体之间、人工培养的孢梗束和野外条件下产生的孢梗束间均存在显著的代谢组差异。人工孢梗束与菌丝体的主要差异代谢物有adenine、tabtoxin biosynthesis intermediate6、antibiotic OS1804、carbobenzoxy glycyl glycyl-L-phenylalanine、N6-(2-hydroxyethyl)adenosine、2,3,5,6,10,14,16-grayanotoxanehepto、hydroxy palmitic acid、antibiotic FD549、curcumin、8-amino-4-methylaconitane-1,3,6,13,14,15,16,18-octol、aphidicolin、PE(18∶0/0∶0)、4-methylaconitane-1,6,8,13,14,16,18-heptol、PC(16∶0/0∶0)、bisparthenolidine、roridin H、PS(21∶0/0∶0)、rhizoxin D等;粉被虫草人工孢梗束和野生型孢梗束的主要差异代谢物有pseudopelletierine、noformicin、tremetone、shogaols、hydroxy palmitic acid、hydroxy-octadecanoic acid、2-linoleoyl glycerol、dodecanoic acid、jacoline、hydroxy-tetracosanoic acid、4-methylumbelliferyl myo-inositol-1-phosphate、riccardin C、metenaticinC、 PI(16∶0/0∶0)、daunomycin、butanoic acid、nonenoic acid、betaine、uraci、4-O-glucopyranosyl-D-gluconic acid、3-O-glucopyranoside等。 其中,具有很强的抗紫外辐射、抗血小板凝结和镇痛等作用的N6-(2-羟乙基)腺苷在人工粉被虫草孢梗束中的含量高于菌丝体,并且和野生粉被虫草含量没有太大差别;色素分子C30H18O13和C30H18O12等在人工孢梗束中的含量均高于菌丝体和其野生孢梗束,说明,在N6-(2-羟乙基)腺苷和天然色素等成分的利用方面,人工培养的粉被虫草具有较高的利用价值。 通过HPLC-DAD-HRMS分析发现,菌株RCEF4730孢梗束和菌丝体的甲醇提取物中含有多种天然色素,主要含有红色和黄色两种色素。人工粉被虫草孢梗束和菌丝体的甲醇提取物还含有一类紫色色素P-2,其分子式是C30H18O14。然后根据此化合物的分子式和紫外吸收波长,在Chapman&Hall天然数据库上查询,初步认为该化合物是一种新的化合物。 利用高相液相色谱仪分离得到三种化合物P-1、P-3、P-4的纯品,其中P-3、P-4均为羟基蒽醌类色素,P-3呈红色,P-4呈黄色。经LC-HRMS和NMR数据解析得知,化合物P-1的分子式为C16H23N3O13,数据库查询发现这是一个新分子式,因此该化合物为新化合物,具体结构尚在鉴定中;化合物P-3的分子式为C30H18O13,其紫外特征吸收峰分别是225nm、266nm、297nm、503nm,系统学名为:2,2,4,4,5,5,8-heptahydroxy-7,7-dimethoxy-1,1-bianthraquinon;化合物P-4的分子式为C30H18O12,其紫外特征吸收峰分别是225nm、266nm、297nm、467nm,系统学名为:2,2,4,4,5,5-hexahydroxy-7,7-dimethoxy-1,1-bianthraquinone。化合物P-3具有清除自由基活性,当P-3的浓度为0.4g/L时,对0.4g/L的DPPH自由基清除率达到了48.18%±0.34。