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2013年H7N9新发突发流感疫情不仅给人类生活造成了严重的干扰和危害,也对我国养禽业造成了毁灭性的打击,疫苗研制是防控H7N9流感的必要技术储备。DNA疫苗能够同时诱导机体的细胞免疫和体液免疫反应,具有良好的交叉免疫保护力,而且制备简单,被认为是应对频繁变异的禽流感病毒(AIV)感染的理想疫苗。为了研制能够有效抵御H7N9流感的DNA疫苗,将H7N9流感病毒A/Anhui/1/2013(H7N9)[AH/1/2013(H7N9)]的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,分别插入到载体pVAXl和pCAGGS中,构建了2种DNA质粒：pVAH7和pCAH7。将构建好的2种质粒转染293T细胞,进行间接免疫荧光、激光共聚焦和Western blot验证,结果表明,两种DNA质粒均可以在293T细胞中表达,表达的HA蛋白定位于细胞膜上。为评价质粒pVAH7和pCAH7对SPF鸡的免疫效力,将pVAH7以60μg剂量,pCAH7以15μg和60μg的剂量单次或加强免疫3周龄SPF鸡,分别在首次免疫后7周和加强免疫后4周在生物安全三级实验室以106EIDs。的流感病毒A/Chicken/Shanghai/S1053/2013(H7N9)[CK/SH/S1053/2013(H7N9)]通过鼻腔接种途径进行感染,于感染后第3d、5d、7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及感染后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果显示,pVAH760μg/羽剂量和pCAH7两种剂量单次免疫后可以诱导产生可检测的HI抗体,加强免疫可诱导产生较高水平的HI抗体,NT抗体水平与HI抗体水平呈正相关,且均高于相对应的HI抗体水平：单次免疫组在攻毒后5d在泄殖腔部位仍可分离到病毒,加强免疫组的个别鸡在病毒感染后3天可检测到一过性的低剂量病毒感染,而对照组在感染后3d、5d和7d均可分离到较高滴度的病毒。结果表明,PVAH7和pCAH7能够对SPF鸡提供良好的保护作用,可以有效抵御异源H7N9病毒的感染和复制。同时将质粒pVAH7和pCAH7对BALB/c小鼠的免疫效力进行了评价。将两种质粒分别按10μg和100μg两个剂量单次或加强免疫6周龄BALB/c小鼠,分别在初次免疫后4周和加强免疫2周后在生物安全三级实验室以105EID5o的流感病毒AH/1/2013(H7N9)通过鼻腔接种途径进行感染。感染后连续观察14天,记录每天的发病情况,在感染后第3天每组随机剖杀5只小鼠采集鼻甲和肺脏用于病毒滴定、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果显示,pVAH7和pCAH7单次免疫后,HI抗体水平几乎检测不到,不能有效阻止病毒在鼻甲和肺部的复制,但免疫小鼠的体重没有下降；在加强免疫后,HI抗体可以检测,能有效降低鼻甲和肺脏中的病毒复制滴度,免疫小鼠体重均没有明显变化。结果表明,pVAH7和pCAH7加强免疫能够对BALB/c小鼠提供有效的保护作用,可以降低H7N9病毒的感染和复制载量。本研究结果表明,质粒pVAH7和pCAH7加强免疫比单次免疫时的总体效果好,能有效抵御病毒的感染和复制,同时诱导产生较高水平的HI抗体。在BALB/c小鼠上质粒pVAH7的免疫效果要优于质粒pCAH7。DNA疫苗质粒pVAH7和pCAH7有望成为控制哺乳动物和禽类H7N9流感疫情的候选疫苗,并有必要进一步采用电击接种等其它策略提高其免疫效力。