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目的:寻求一种快速、简便、经济的监测外周血干/祖细胞采集时机的方法。探讨采用冷冻保存对外周血干/祖细胞的影响。
方法:本试验根据Sysmex XT 2000I多通道血细胞分析仪的VCS技术(即体积、射频、激光技术)及化学染色原理,计数动员后9例健康异基因外周血干细胞移植供者和5例白体外周血干细胞移植患者外周血造血干/祖细胞所分布的单核细胞群的绝对数,探讨其与CFU-GM集落计数的关系。于动员过程中,取两者外周血标本用SysmexXT 2000I多通道血细胞分析仪计数单核细胞群绝对数,并计数CFU-GM集落数;采用冷冻保护剂(二甲亚砜)对外周血干/祖细胞采集物进行冷冻保存,在程序降温后置于液氮中保存。2月后进行快速温水浴复苏,冷冻前后观测细胞台盼蓝拒染试验、CFU-GM集落计数,分别从细胞活力、集落形成能力方面比较冷冻保存对外周血干细胞的影响。
结果:
1.动员后外周血干/祖细胞监测:单核细胞群绝对数与CFU-GM集落产率存在良好的直线相关关系。回归方程:单核细胞群-343.55+87.525 CFU-GM。健康异基因外周血干细胞移植供者应用G-CSF动员后,单核细胞群绝对数的峰值出现于使用后的第5、6天。
2.冷冻保存对动员后外周血造血干/祖细胞采集物的影响:
1)细胞活力:外周血造血干/祖细胞采集物冷冻保存前的台盼蓝拒染率97.24±1.15%,外周血造血干/祖细胞采集物冷冻保存2月后的台盼蓝拒染率为97.06±1.10%,两者无显著性差异(P>0.05)。
2)外周血干/祖细胞采集物CFU-GM产率(个/2×10<4>MNC):冷冻前为55.11±17.87,冷冻后55.00±17.88,两者无显著性差异(P>0.05)。
结论:
1.利用Sysglex XT2000I多通道全自动血细胞分析仪计数单核细胞群绝对数可以作为外周血干/祖细胞采集时机动态监测的一种监测方法。
2.动员后外周血单核细胞群峰值出现在动员后的第5、6天。
3.本实验采用的冷冻保存方法对外周血干/祖细胞的台盼蓝拒染率以及CFU-GM集落产率无明显影响。