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目的梗阻性肾病(obstructive nephropathy,ON)是泌尿外科常见疾病,以肾小管间质纤维化为主要病理特点。儿童梗阻性肾病最终可导致终末期肾脏疾病(end-stage renal disease ESRD),梗阻性肾病占所有ESRD的0.3%,占所有儿童肾移植的16.1%。骨髓间充质干细胞(MSCs)具有自我增殖和多向分化潜能的特点,可向中胚层、内胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化,包括成骨细胞、心肌细胞、神经细胞和肾脏细胞等,有研究表明骨髓MSCs在急性肾脏损伤小鼠模型中可以促进肾脏结构修复、改善肾功能。肝细胞生长因子(HGF)是促进成体干细胞向肾脏细胞分化的候选因子,还具有阻止肾小管细胞发生凋亡的能力。本实验通过体外分离、培养、纯化和扩增大鼠骨髓MSCs,用带有肝细胞生长因子基因的腺病毒(Ad-HGF)进行转染,并建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠动物模型,将转染Ad-HGF的MSCs移植入UUO大鼠体内,观察其是否能够迁移、分布、定居到肾脏,为梗阻性肾病的基因治疗及细胞替代治疗提供一定的理论基础。材料与方法体外分离、培养雄性SD大鼠MSCs,流式细胞仪进行CD34、CD90表型鉴定;以不同强度携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-GFP)转染MSCs,用流式细胞仪测定转染效率,筛选出最佳转染强度(MOI),并以最佳转染强度将HGF基因体外转染MSCs;用ELISA法检测转染后MSCs的HGF表达水平。选择雌性2月龄SD大鼠16只,制作UUO大鼠动物模型,随机分为移植组和对照组,再以UUO术后7、14天各分为2组,每组各4只。于UUO术后6惺蹦诮続d-HGF的MSCs经鼠尾静脉注射到移植组大鼠体内,对照组注射等量生理盐水,于UUO术后7、14天分别处死移植组及对照组大鼠,取双侧肾脏,制作石蜡切片,利用Y染色体原位杂交方法检测转染Ad-HGF的MSCs在UUO大鼠肾脏中的分布情况。结果1、骨髓MSCs原代培养7-9天可传代,传代后细胞增殖加快,4-5天可再次传代;流式细胞仪鉴定结果显示骨髓MSCs中CD90阳性细胞占99%,不表达CD34。2、转染强度MOI=400时,转染效率可达73.29%。3、Ad-HGF转染MSCs 48小时,细胞培养上清HGF表达含量达到最高峰。4、Y染色体原位杂交结果表明:在UUO大鼠术后7、14天梗阻侧肾脏均可见Sry阳性细胞,而梗阻对侧肾脏及对照组双侧肾脏均未见Sry阳性细胞。结论1、贴壁细胞分离法可以分离、纯化大鼠MSCs。2、MSCs可作为基因载体细胞,用于HGF的基因治疗。3、在UUO大鼠模型中,经鼠尾静脉注射Ad-HGF转染的MSCs可以靶向定位到梗阻侧肾脏。