量子点标记与有机荧光试剂标记对病毒活性影响的比较

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在生命科学领域,荧光成像技术是一种重要的手段。种类繁多的荧光染料中,硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)应用最为广泛,但其易于光漂白,无法对标记物进行长期的追踪和观察标记物的动力学过程,在免疫细胞化学技术应用中又易造成非特异染色,存在敏感性偏低,荧光效率较低等缺点,现已逐渐被新型荧光纳米材料所取代。作为一种理想的荧光纳米探针,量子点(Quantum Dots, QDs)因具有宽的激发光谱且连续分布,发射光谱窄而对称,颜色可调,光化学稳定性高,荧光寿命长等优越的荧光特性,在分析化学及生命科学领域引起广泛的关注。量子点(QDs)因其特殊的光学性质越来越多的被用于标记及示踪病毒,但是,相比有机荧光试剂,QDs体积更大,且含有有毒金属元素,很多人都认为,QDs标记可能会影响被标记物的生物活性,但量子点标记病毒对病毒毒性的影响方面的研究也鲜有报道。禽流感病毒一般都具有严格的宿主特异性,能在天然宿主细胞上很好进行地复制和传播,因此,我们选择低致病性禽流感病毒H9N2作为研究对象,以人肺上皮癌细胞A549细胞作为宿主细胞模型,分别以QDs和常用有机荧光试剂—荧光素异硫氰酸酯(FITC)标记H9N2病毒,以未标记病毒、QDs标记病毒、FITC标记病毒侵染宿主细胞,通过病毒侵染后细胞活性和细胞因子分泌水平的变化,比较了QDs标记和FITC标记对病毒活性的影响。进一步考察量子点能否安全应用于荧光标记及成像,为研究病毒的致病机制及预防病毒性疾病奠定重要的理论基础,为评价量子点的生物效应、量子点标记对病毒本身行为的影响、研制适用于活体示踪的量子点提供重要依据,为此,本文的研究工作具有实际意义。本论文主要包括以下方面的内容:(1)以链霉亲和素联接的量子点与亲和素联接的异硫氰酸荧光素通过生物素-亲和素的经典生物反应标记H9N2病毒,以A549人肺上皮癌细胞为宿主细胞模型,探究了不同浓度和不同时间条件下的宿主细胞活性变化,比较QDs标记和FITC标记病毒对病毒活性的影响。(2)以同样的标记物和标记策略标记H9N2病毒,比较标记后病毒对宿主细胞人肺上皮癌细胞A549分泌IL-6、IFN-γ、IL-12水平的影响。(3)以同样标记策略标记H9N2病毒,选择QDs605和QDs525两种不同粒径量子点标记H9N2病毒探究对细胞活性的影响。我们的结果证实,与FITC标记相比,在短时间孵育的情况下,QDs标记对病毒的活性影响更小,说明QDs不仅比有机荧光试剂有更强的荧光性能,而且对被标记物活性的影响也更小,是一种优良的荧光标记试剂。基于QDs更优异的荧光性能,可以认为,QDs更适合用于病毒的示踪研究。
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