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【目的】探讨线粒体内膜蛋白Mic60过表达对大鼠内耳血管纹边缘细胞氧化应激损伤的作用。【方法】(1)取出生0-3天的新生SD大鼠耳蜗外侧壁血管纹组织进行原代培养,经纯化后的边缘细胞(MCs)在普通光学显微镜及免疫荧光显微镜下观察、鉴定。(2)50Um/ml葡萄糖氧化酶作用边缘细胞4hr后诱导MCs氧化应激模型,流式细胞仪检测细胞内的ROS水平。(3)免疫荧光及Western Blot观察Mic60在MCs中的表达及分布情况。用MCs感染预实验筛选出Mic60-GFP-Ad及GFP-Ad感染边缘细胞的合适滴度。(4)将体外培养的原代MCs根据不同的处理分为四组:C组即未经任何处理的对照组;GO组即葡萄糖氧化酶诱导建立的氧化应激模型组;Mic60-组即原代培养的MCs转染空载病毒GFP-Ad后再经葡萄糖氧化酶诱导的氧化应激模型组;Mic60+组即原代培养的MCs转染Mic60-GFP-Ad后再经葡萄糖氧化酶诱导的氧化模型组。(5)流式细胞仪上检测各组细胞内的ROS水平,Western Blot检测Mic60、SOD1、SOD2在MCs中的蛋白水平。【结果】(1)在普通光学显微镜下观察到MCs接种后培养24hr后贴壁生长,单层可融合形成典型的“铺路石”样外观,后期可见数个细胞重叠生长形成的“dome”样结构。在免疫荧光镜下观察检测到MCs上皮细胞特异性蛋白CK18表达呈阳性。(2)50Um/ml葡萄糖氧化酶作用边缘细胞4hr后,流式细胞仪上检测细胞内的ROS水平,发现实验组与对照组相比其细胞内的ROS水平显著上升(p<0.01)。(3)免疫荧光观察Mic60主要表达于细胞质,Western Blot结果表明Mic60在线粒体内表达。通过MCs感染预实验筛选出Mic60-GFP-Ad及GFP-Ad的合适滴度,分别为1.2×107PFU/ml、1.0×107PFU/ml。免疫荧光镜下观测到腺病毒转染MCs 48hr后其表达较强且细胞状态较好。(4)流式细胞仪检测四组离体培养的MCs中ROS的水平,发现GO组、Mic60-组ROS水平较C组均升高(p<0.01);但Mic60+组与Mic60-组相比较ROS水平显著降低(p<0.01)。(5)Western Blot检测各组Mic60、SOD1、SOD2在MCs线粒体中的蛋白表达,发现GO组、Mic60-组Mic60、SOD1、SOD2的蛋白表达水平较C组略有升高,但无统计学意义(p>0.05);Mic60+组Mic60、SOD2蛋白水平较Mic60-组显著升高(p<0.01),但SOD1表达上升不具有统计学意义(p>0.05)。【结论】Mic60蛋白在大鼠内耳血管纹边缘细胞的线粒体内表达,Mic60的过表达可以降低MCs的ROS水平,这可能与边缘细胞线粒体内的抗氧化酶SOD2的蛋白水平升高具有一定的关系。