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蓝莓是贵州省的主要果树之一,蓝莓根腐病是蓝莓的毁灭性病害,对蓝莓生长构成严重威胁。目前,蓝莓根腐病在贵州省黔东南州的麻江、黄平、丹寨等县及黔南、黔西南部分地区均有发生,生物防治是蓝莓根腐病的绿色防治方法,是保障有机蓝莓生产的重要举措,对提高蓝莓果农的经济效益和农民的脱贫致富具有重要意义。本文以蓝莓根腐病菌为靶标病原菌,开展了如下研究内容: 1.蓝莓根腐病病原菌的鉴定 本文从蓝莓根腐病病株上共获得病原菌50株,对病原菌的致病性测定采用柯赫法则。根据镰刀菌分类系统(Booth,1971)和《植物病原真菌学》(张中义等, 1986)进行病原菌的鉴定,结果表明:在PDA平板上,28℃恒温培养5 d,病原菌呈粉白色略带有紫色的圆形菌落,平均直径达7.61 cm,突起絮状,背面呈淡紫色,白色呈棉絮状的气生菌丝,培养10 d后,能产生较多0-1个隔的无色肾形或卵圆形小型分生孢子(7.4~16.3μm×3.3~5.0μm);镰刀型、无色、2-5个隔的大型分生孢子(16.3~29.9μm×2.1~7.7μm),两端细胞稍尖;球形或近球形的厚垣孢子;瓶状分生孢子梗。将病原菌菌株的ITS序列与GenBank中己知菌株进行同源比较,发现与尖孢镰刀菌的同源性达100%。结合形态学和分子生物学,将50株蓝莓根腐病病原菌均鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。 2. 蓝莓根腐病生防菌的室内抑制率测定与鉴定 采用土壤系列稀释分离法分离采自蓝莓根围土样中的微生物。采用平板对峙法,以蓝莓根腐病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为靶标菌,获得较强抑制作用的生防菌14株(2株真菌、10株细菌和2株放线菌),其中生防细菌抑制效果相对最好,抑制率高达83.89%,其次是放线菌,生防真菌的抑制效果相对最差,抑制率在60%~73%之间。 结合形态特征、生理生化试验和分子鉴定,对蓝莓根腐病菌有较强拮抗作用的14 株拮抗菌进行鉴定。通过形态观察,结果表明 2株真菌均为青霉菌(Penicillium);结合生理生化测定,结果表明10株细菌均是革兰氏阳性杆菌, 产芽孢,属于芽孢杆菌属(Bacillus)细菌;2株放线菌孢子链均呈螺旋形,分生孢子呈卵圆形或瓜子形,菌落表面有黄色液体小滴,均属于链霉菌属(Streptomyces)。ITS测序结果表明生防真菌M-1菌株与微紫青霉菌、M-8菌株与阿达青霉菌的同源性高达 99%以上,可将菌株 M-1 鉴定为微紫青霉菌(Penicillium janthinellum),M-8鉴定为阿达青霉菌(Penicillium adametzii)。生防细菌与芽孢杆菌(Bacillus) 同源性均高于99%,因此可将菌株B-2和B-10鉴定为解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens)、B-3菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌亚种(B. amyloliquefaciens subsp.)、B-4菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(B. subtilis) 、B-9菌株鉴定为枯草芽孢杆菌亚种(B. subtilis subsp.) 、菌株B-5和B-6鉴定为暹罗芽孢杆菌(B. siamensis) 、B-7菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis) 、B-8菌株鉴定为特基拉芽孢杆菌(B. tequilensis),B-1菌株鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。生防放线菌均与链霉菌(Streptomyces)同源性高达99%以上,可将S-1、S-2菌株鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。 3. 蓝莓根腐病生防菌盆栽防效试验 所选供试菌株为生防真菌(M-8、M216-2)、细菌(B-6、B-7、B-10)、放线菌(S-1)共6株拮抗菌进行单个生防菌的蓝莓根腐病盆栽防效试验,结果表明,6株拮抗菌均对蓝莓根腐病有一定的防治效果。其中以B-6菌株的防效相对最好,防效高达70%,M-8菌株的相对防效最差,仅仅只有30%。其中M216-2菌株对蓝莓根腐病的防治效果除了仅次于生防菌B-6、B-7、S-1以外,均高于其余各处理。 选择抑制率最好的生防真菌(M216-2)、细菌(B-6)、放线菌(S-1)共3株菌株,两两组合进行盆栽防效试验,结果表明:生防菌组合C-1(M216-2+B-6)、组合C-2(M216-2+S-1)、组合C-3(B-6+S-1)均对蓝莓根腐病相当好的防治效果,其中生防菌组合C-1和组合C-3的盆栽防治效果相对较好,均高达80%,且生防菌组合C-1和组合C-3的防治效果都比其单一菌株M216-2、B-6和S-1的效果好。而生防菌组合C-2(40%)的防治效果相对较差,且生防菌组合C-2的防治效果低于其单一菌株M216-2和S-1的效果。 选择抑制率最好的生防真菌(M216-2)、细菌(B-6)、放线菌(S-1)共3株菌株组合成组合菌D进行盆栽防效试验,结果表明:三株生防菌的复配组合菌D对蓝莓根腐病有很好的防治效果,为70%。三株生防菌的复配组合菌D的防治效果高于两两复配组合C-2的防治效果,且低于组合C-1和组合C-3的防治效果。在不同的防治方法方面,不同时间的处理,防治效果差异明显不同,以处理1(拮抗菌处理幼苗48 h后接种病原菌)和处理2(拮抗菌处理幼苗后立即接种病原菌)的防治效果相对最好。